[出典] W. Gu et al. “Depletion of Abundant Sequences by Hybridization (DASH): using Cas9 to remove unwanted high-abundance species in sequencing libraries and molecular counting applications.” Genome Biol. 2016 Mar 4;17:41 ; Corresponding author J. L. DeRisi (UCSF)
- DASH (Depletion of Abundant Sequences by Hybridization) 法を開発。全ゲノムやメタゲノムのライブラリーにおいて解析対象以外の配列を排除し、結果的に対象配列をエンリッチメント
- HeLa細胞:全RNAの61%が12Sと16SミトコンドリアrRNA。ミトコンドリアrRNAを標的とする54種類のsgRNAを組み込んだDASHによって、その99%以上をシーケンシングから排除し、結果的にその他のRNAのエンリッチメントを実現。
- 感染症に因る髄膜炎と脳炎患者の脳脊髄液:メタゲノム解析において、DASHを利用するとヒトのミトコンドリア12Sと16S遺伝子が大きく減少し、病原菌由来の16Sまたは18Sのフラグメントが2〜3.9倍に。
- ヒトがん細胞:KRAS G12を標的とするsgRNAを組み込んだDASHによって予め野生型KRAS排除(DAShing)し、変異型KRAS G12D(c.35G>A)の検出感度を大幅増。
- [情報拠点注] 関連論文
- 微生物ゲノムの大領域をCas9を利用して分離・クローニングする実験プトロコル(Cas9-Assisted Targeting of CHromosome segments、CATCH):Wenjun Jiang;Ting F. Zhu (清华大学)
- Highly efficient CRISPR/Cas9-mediated TAR cloning of genes and chromosomal loci from complex genomes in yeast Nucleic Acids Res. 2015 Apr 30;43(8):e55.
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