1. 膠芽腫患者由来幹細胞 (GSC)の遺伝的脆弱性とテモゾロミド感受性の機構を、ゲノムワイドCRISPR-Cas9スクリーンで解き明かす
[出典] "Genome-Wide CRISPR-Cas9 Screens Expose Genetic Vulnerabilities and Mechanisms of Temozolomide Sensitivity in Glioblastoma Stem Cells" MacLeod G [..] Dirks PB, Angers S. Cell Rep. 2019-04-16.
  • 適応度スクリーニングからGSCの生存・増殖に必須の遺伝子群を同定し、抗がん剤テモゾロミドを利用したスクリーニングから薬剤耐性を担う遺伝子群と、薬剤感受性を担い遺伝子群を同定、創薬標的候補を探り出した。
  • SOX転写因子ファミリーのSOCS3USP8、およびDOT1L、およびタンパク質のユビキチン様修飾システムufmylationが、GSCの成長に必須であることを同定した。
2. CRISPR-SONIC: HDRに依存しない癌遺伝子ノックインを実現し、癌モデルマウス細胞を迅速生成
[出典] "CRISPR-SONIC: targeted somatic oncogene knock-in enables rapid in vivo cancer modeling" Mou H, Ozata DM, Smith JL [..] Xue W (University of Massachusetts Medical School). Genome Med. 2019-04-16.
  • SONICはSomatic Oncogene kNock-In for Cancer modeling)の意 (Fig. 1引用下図参照)2019-04-21 19.09.47
  • はじめに、in vitroで、β-アクチンの3'-UTRを標的とするCas9/sgActin (上図AではCas9/sgAと表記)で3'-UTRを切断し、切断部位に、直鎖化したドナープラスミドがNHEJ過程を介して挿入されることを、GFPレポーターのノックインで確認
  • マウス尾静脈からCRISPR-SONICシステムを注入し、GFP、GFPとIRES (internal ribosome entry site)のノックインを肝細胞で確認;がん遺伝子Rasをノックインしp53欠損させることで、マウスに肝内胆管細胞癌を誘導
3. CRISPR KOでCHO細胞を整える
[出典] "Anxa2‐ and Ctsd‐knockout CHO cell lines to diminish the risk of contamination with host cell proteins" Fukuda N,  Senga Y,  Honda S. Biotechnol Prog. 2019-04-11.
  • 医療用組み換えタンパク質の生産に利用されるCHO細胞の宿主因子に起因する免疫原生のリスクを徹底的に除去することを目的に、Anxa2‐ ならびに Ctsd‐のノックアウトをCRISPR/Cas9で可能なことを実証
4. CRISPR/Cas9システムによるミツバチ寄生トリパノソーマ原虫の遺伝子破壊
[出典] "Gene disruption of honey bee trypanosomatid parasite, Lotmaria passim, by CRISPR/Cas9 system" Kadowaki T, Liu Q (西交利物浦大学). Front Cell Infect Microbiol. Accepted 2019-04-10.
  • ミツバチの後腸に感染するトリパノソーマ原虫Lotmaria passimの機能ゲノミクスの実現に向けて、CRISPR/Cas9システムのエレクトロポレーションと薬剤選択を経て、tdTomatoまたはCas9を発現するL. passimクローンを作出し、さらに、ミルテフォシントランスポーターとチロシンアミノトランスフェラーゼをHDRを介した薬剤耐性遺伝子への置換により破壊
5. [プロトコル] LeishGEdit: CRISPR-Cas9によるリーシュマニアの迅速な遺伝子のノックアウトとタギング法
[出典] PROTOCOL "LeishGEdit: A Method for Rapid Gene Knockout and Tagging Using CRISPR-Cas9" Beneke T, Gluenz E. In: Clos J. (eds) Leishmania. Methods in Molecular Biology. 2019-04-13; 関連Webサイト http://leishgedit.net/

6. イネにおけるCBEの適用範囲の拡大と効率の向上
[出典] "Increasing cytosine base editing scope and efficiency with engineered Cas9-PmCDA1 fusions and the modified sgRNA in rice" Wu Y [..] Yang J. Front Genet. Accepted 2019-04-09
  • これまでのCBEはNGG PAMから数塩基に適用範囲が限られていた。北京市農林科学院の研究チームは今回、SpCas9ニッカーゼまたはSpCas9-VQRのニッカーゼに、ヤツメウナギ由来のシチジンデアミナーゼPmCAD1とUGIを組み合わせたSpCas9n-pBEとVQRn-pBEを開発した。さらに、sgRNAの改変により、VQRn-pBEの編集効率を1.3~7.6倍へ向上。
7. CRISPR/Cas9によりキシロースからのn-ブタノール生産を実現
[出典] "CRISPR/Cas9-mediated engineering of Escherichia coli for n-butanol production from xylose in defined medium" Abdelaal AS, Jawed K Yazdani SSJ. Ind Microbiol Biotechnol. 2019-04-13
  • E. coli MG1655のパスウエイ改変によりグルコースを含む天然培地で5.4g/Lのn-ブタノール生産を達成し、このシステムをエタノール生産E. Coli SSK42に組み込み、その内在エタノール生産関連遺伝子を、CRISPR/Cas9により合成ブタノール生産カセットに置換することで、キシロース培地からのn-ブタノール生産 (4.32 g/L)を実現。