CRISPRメモ_2019/10/12 (6件) : crisp

1. 効果的癌療法をもたらす自己組織化するナノ担体によるタンパク質デリバリー

[出典] Simple and Efficient Targeted Intracellular Protein Delivery with Self‐Assembled Nanovehicles for Effective Cancer Therapy. He X, Long Q, Zeng Z, Yang L, Tang Y, Feng Y. Adv Funct Mater. 2019-10-07.

重慶大学の研究グループは親水性シクロデキストリン (CDEH)をタンパク質の細胞への送達に利用可能なことを示した。
CDEHは水溶液中でナノ粒子へと自己組織化し、タンパク質溶液と混合するだけでタンパク質を取り込み、複雑な処理を必要とせず、また、標的へ誘導する分子を結合可能である.
癌細胞表面に発現するヌクエオリンを標的とするDNAアプタマーであるAS1411で標識したCDEHによりサポリンを、ヒト乳がん細胞MDA-MB-231を移植したマウスに送達し、サポリンが腫瘍に集積し、腫瘍増殖を効果的に阻害した。
また、葉酸を標的とするCDEHにより、Cas9とPolo-like kinase1 (Plk1)コーディング遺伝子を標的とするsgRNAをHeLa腫瘍組織へ送達し、遺伝子欠損効率47.1%とタンパク質発現レベルの64.1%減を実現した。

2. CRISPR/Cas9療法を最適化する観点から、CRISPR/Cas9システムの細胞への導入から、遺伝子編集進行までの時間経過を測定

[出典] Temporal analyses of CRISPR-directed gene editing on NRF2, a clinically relevant human gene involved in chemoresistance. Banas K [..] Kmiec EB. bioRxiv. 2019-10-10.

Gene Editing Institute (Helen F. Graham Cancer Center & Research Institute, ChristianaCare)の研究グループは非小細胞肺癌療法の研究の中で、NRF2の機能的ノックアウトによって化学療法剤への感受性が亢進することを見出していた。
今回、CRISPR/Cas9によるNRF2ノックアウト実験において、GFPで標識したSpCas9ならびにATTO 550で標識したtracrRNAとcrRNAからなるRNPをA549細胞へエレクトロポレーション (Necleofection)し、NRF2へのindel誘導を蛍光顕微鏡で追跡した。その結果、RNPが細胞核に迅速に局在するのに対して、NRF2遺伝子のノックアウトは4~8時間後になることを見出した。
関連論文：Kinetics and Fidelity of the Repair of Cas9-Induced Double-Strand DNA Breaks.　Brinkman EK, Chen T, de Haas M, Holland HA, Akhtar W, van Steensel B. Mol. Cell 70, 801-813.e6 (2018).

3. [プロトコル] ファージ感染と水平遺伝子伝播 (HGT)に抗する機構、CRISPR-Casシステム、の解析法

[出典] [Protocol] Methods for the Analysis and Characterization of Defense Mechanisms Against Horizontal Gene Transfer: CRISPR Systems. Calvo-Villamañán A, Bernheim A, Bikard D. In: de la Cruz F. (eds) Horizontal Gene Transfer. Methods in MIMB 2019-10-05.
タイプII-A CRISPR-CasシステムのSauCas9をモデルとして解説

4. [プロトコル] ハンチントン病のCRISPR/Cas９遺伝子治療

[出典] [Protocol] Gene Therapy for Huntington’s Disease Using Targeted Endonucleases. Dabrowska M, Olejniczak M. In: Richard GF. (eds) Trinucleotide Repeats. Methods in Molecular Biology. 2019-10-06.

ハンチントン病の病因であるHTT遺伝子におけるCAG伸長領域を標的とする一対のsgRNAsとCas9nにより、CAG伸長を切り出し、HTT遺伝子にフレームシフト変異と未成熟終止コドンを誘導し、HTTイタをノックアウト

5. CRISPR/Cas9により、相同組み換えによらずに、ニワトリ細胞のオボアルブミン (OVA)遺伝子座にEGFP発現カッセットノックインを実現

[出典] Targeted knock-in into the OVA locus of chicken cells using CRISPR/Cas9 system with homology-independent targeted integration. She M, Kawabe Y, Ito A, Kamihira M. J Biosci Bioeng. 2019-10-05.

6. CRISPR技術に基づいた遺伝子ドライブに対する意識調査

[出典] Efforts to enhance safety measures for CRISPR/Cas-based gene drive technology in Japan. Tanaka T et al. Journal of Environment and Safety 2019-10-07.