１．アレイ型CRISPR-Cas9によるゲノム編集とハイコンテントスクリーニングの融合
  • [出典] de Groot R, Lüthi J, Lindsay H, Holtackers R, Pelkmans L. "Large‐scale image‐based profiling of single‐cell phenotypes in arrayed CRISPR‐Cas9 gene perturbation screens" Mol Syst Biol. 2018 Jan 23;14(1):e8064.
  • CRISPR-Cas9スクリーニングの多くがプール型ライブラリーを利用して行われているが、プール型スクリーニングの場合、scRNA-seqを利用しても細胞ごとの大規模な多面的プロファイリングが困難であり、また、細胞の形態、細胞微小環境あるいは核膜孔複合体のような細胞内構造の観察は不可能である。Zurich大学の研究チームは今回、アレイ型CRISPR-Casライブラリー、顕微鏡画像の自動解析装置ならびに機械学習を組み合わせたパイプラインを構築した。
  • 1,457遺伝子を標的とする2,281種類のsgRNA, spCas9およびレポーターを含むプラスミドのライブラリーを、384ウエルのプレートに撒いたHeLa細胞に一時的にトランスフェクション
  • 同一ウエル内で形質導入された細胞と形質導入されなかった細胞の比較、および、ウエル間での比較から、表現型をプロファイリング
２．鎖骨頭蓋異形成症（cleidocranial dysplasia: CCD）患者由来のiPSCsの変異をCRISPR/Ca9で修復することで、頭蓋冠骨不全モデルラットにおける骨再生を改善
  • [出典] Saito A et al. "Targeted reversion of induced pluripotent stem cells from patients with human cleidocranial dysplasia (CCD) improves bone regeneration in a rat calvarial bone defect model" Stem Cell Res Ther. 2018 Jan 22;9(1):12.
  • CCD-iPSCに、CRISPR/sgRNA発現プラスミドと修復用ドナープラスミドをエレクトロポレーションすることで、Runt-related transcription factor 2(RUNX2)遺伝子における変異の修復を実現し、さらに、このRev-iPSCによる骨再生の可能性も示した。
３．[特許]RNAの3'末端、5'末端およびその双方をキャップすることで、RNAの発現と安定性を向上し、免疫原性を低減
  • NOVEL 3' END CAPS, 5' END CAPS AND COMBINATIONS THEREOF FOR THERAPEUTIC RNA
  • US 2018/0002368 A1. PubDate 01/04/2018
  • Inventors Barnes-seeman, David et al.
  • Assignee NOVARTIS AG (Basel, CH) 
  • CRISPR/Cas9技術に展開可能
４．リン脂質スクランブラーゼ１ (PLSCR1) は、A型インフルエンザウイルス核タンパク質（NP）と相互作用して、感染細胞への核への移行を阻害することで、ウイルス複製を抑制
  • [出典] Luo W, Zhang J, Liang L, Wang G, Li Q, Zhu P, Zhou Y, Li J, Zhao Y, Sun N, Huang S, Zhou C, Chang Y, Cui P, Chen P, Jiang Y, Deng G, Bu Z, Li C, Jiang L, Chen H. "Phospholipid scramblase 1 interacts with influenza A virus NP, impairing its nuclear import and thereby suppressing virus replication" PLoS Pathog. 2018 Jan 19;14(1):e1006851.
  • PLSCR1がNPと相互作用することをY2Hで同定し、加えて、PLSCR1をsiRNAでノックダウンあるいはCRISPR/Cas9でノックアウトすると、ウイルス感染が亢進することを同定。
５．IFN制御因子8（IRF8）は、カスパーゼ１の発現を調節して、B細胞受容体刺激および化学誘導に応答したEBVの再活性化を促進する
  • [出典] Lv DW, Zhang K, Li R. "Interferon regulatory factor 8 regulates aspase-1 expression to facilitate Epstein-Barr virus reactivation in response to B cell receptor stimulation and chemical induction" PLoS Pathog. 2018 Jan 22;14(1):e1006868.
  • CRISPR/Cas9でIRF8を欠損させると、EBVの再活性化が顕著に抑制される。