1.ヒト細胞はSpCas9に対して特異的なエフェクターT細胞と制御性T細胞を生成する

出典:"High prevalence of S. pyogenes Cas9-specific T cell sensitization within the adult human population - A balanced effector/regulatory T cell response" Wagner DL, Amani L,Wendering DJ, Reinke P,  Volk HD, Schmueck-Henneresse M (Charité University Medicine Berlin). bioRxiv Posted. April 4, 2018. Nat Med. 2018 Oct 29

背景
  • 遺伝子治療に利用されるベクターや遺伝子を改変するカーゴに対する免疫応答は、治療の効果を失わせ、重篤な副作用を生じる恐れがある。これまでに、CRISPR/Cas9をコードしたベクターを処置したマウスにおいて、Cas9に対する液性免疫応答と細胞性免疫応答が報告されている(参考文献 5, 6)。また、ヒト血清にSpCas9に対する抗体が存在することも報告されている(crisp_bio関連記事参照)。
  • 液性免疫応答については、CRISPR/Cas9を利用する遺伝子治療の試みの多くで、Cas9を一時的に発現させるかまたはCas9タンパク質を直接標識組織に送達することから、無視することも可能であろう。しかし、細胞におけるCas9タンパク質の分解に由来するペプチドが、遺伝子編集を受けた細胞の表面に提示され、T細胞に認識される可能性があり、一次T細胞応答は回避あるいは遅らせることが可能であるが、免疫記憶が存在する場合はその影響を無視することはできない。
成果
  • ドイツ (ベルリン) の研究チームは今回、SpCas9で刺激した健常者由来のヒト末梢血単核球に、SpCas9特異的なメモリー/エフェクターT細胞 (TEFF)が広く存在し、一方で、SpCas9に応答する制御性T細胞 (TREG)の生成がTEFFの生成と逆相関することを見出した。したがって、遺伝子治療において望ましくないTEFFの作用をTREGで制御する手法が必要である。また、Cas9に特異的なTEFFとTREG細胞のバランスが、Streptococcus pyogenes感染症に大きな意味を持っていると考えられる。
crisp_bio関連記事参照
2.新奇Cas9をAAVにて送達しモデルマウスで効率的in vivoゲノム編集
  • "All-in-One Adeno-associated Virus Delivery and Genome Editing by Neisseria meningitidis Cas9 in vivo" Ibraheim R, Song CQ,  Mir A, Amrani N,  Xue W,  Sontheimer EJ. bioRxiv. Posted April 4, 2018.
  • 独自のPAMs (N4GAYT>N4GYTT/N4GAYA/N4GTCT) を認識し小型(1,081 amino acids, 3.16 kb)で高精度なNeisseria meningitidis Cas9 (NmeCas9)が、SpyCas9、SauCas9、CjeCas9の戦列に加わった;NmeCas9とsgRNAのコンストラクトを単一rAAVによって尾静脈からハイドロダイナミック法でモデルマウスに投与;遺伝性高チロシン血症モデルマウスのHpd遺伝子を標的として、チロシン分解パスウエイをリプログラム; C57Bl/6マウスのPcsk9遺伝子を標的として、コレステロールレベル低下;遺伝子改変効率 > 35%
3.CRISPR技術によりCpGアイランドの“insulator scanning”:プロモーターの調節領域同定を目指して
  • "Functional Insulator Scanning of CpG Islands to Identify Regulatory Regions of Promoters Using CRISPR" Grob A, Marbiah M, Isalan M. In: Vavouri T., Peinado M. (eds) CpG Islands. Methods in Molecular Biology, vol 1766. Humana Press, New York, NY
  • “insulator scanning”:MDR1 遺伝子のプロモーター領域の2箇所のCpGアイランドを標的として、CRISPR技術により二本鎖DNAを切断しβーグロビン・インスレーター配列 (5′HS5)を挿入;MDR1遺伝子の転写と機能を評価
4.CRISPR/Cas9によりeIF4Gアレルに変異を導入することで、イネツングロ病 (RTD)に対する耐性を帯びたイネを育種
  • "Novel alleles of rice eIF4G generated by CRISPR/Cas9-targeted confer resistance to Rice tungro spherical virus" Macovei A, Sevilla NR, Cantos C, Jonson G, Slamet-Loedin I, Čermák T, Voytas D, Choi IR, Chadha-Mohanty P. Plant Biotechnol J. 2018 Mar 31.
  • CRISPR/Cas9による変異誘発実験から、eIF4G遺伝子のSVLFPNLAGKSにおけるインフレーム変異が、RTDの病因ウイルス(Rice tungro spherical virus)に対する耐性をもたらすことを見出した。また、変異体にCas9配列は存在しなかった。
5.[レビュー]CRISPR技術などの部位特異的変異導入法で作出された植物はGMOか
  • "The Swedish policy approach to directed mutagenesis in a European context" Eriksson D. Physiol Plant. 2018 Mar 30.
  • EU諸国の中で方向性が定まっていない表題についてスエーデン政府での議論
6.[レビュー]メタノール資化酵母Pichia pastorisにおける組換えタンパク質発現のボドルネックを克服する遺伝子およびプロセスの改変
  • "Gene and process level modulation to overcome the bottlenecks of recombinant proteins expression in Pichia pastoris" Prabhu AA, Boro B, Bharali B, Chakraborty S, Dasu VV. Curr Pharm Biotechnol. 2018 Mar 28
  • Pichia pastorisは効率的なタンパク質発現系であるが、組換えタンパク質の発現おいて解消すべきボトルネックが存在する。多様な実験条件の最適化をレビューするとともに、最近の、組換えPichiaの表現型の特性を対象とする代謝フラックス解析を含むシステム生物学と合成生物学の研究の進、および、CRISPR-Casシステムによるゲノム編集をレビュー
7.ペスト菌の分子分類と分離株の発生源追跡:10年間の中国Yulong地方のペストフォーカス・サーベイランスから
  • "Ten years of surveillance of the Yulong plague focus in China and the molecular typing and source tracing of the isolates" Wang P,  Shi L,  Zhang F,  Guo Y,  Zhang Z,  Tan H,  Cui Z,  Ding Y,  Liang Y,  Liang Y,  Yu D,  Xu J,  Li W,  Song Z. PLoS Negl Trop Dis. 2018 Mar 30;12(3):e0006352.
  • 2005年Yulong地方で5名発症2名死亡;2006年から2016年までサーベイランス;野生齧歯類のペスト菌 (sylvatic plague)がリザーバ;DFR、反復配列多型 (VNTR)のマルチローカス解析 (MLVA)およびCRISPR遺伝子座の比較から分子分類し系統解析
8.[特許]CRISPR/Cas9を含む一時的遺伝子発現による植物ゲノムの精密な部位特異的改変
  • US 2018/0073035 A1 "A METHOD FOR PRECISE MODIFICATION OF PLANT VIA TRANSIENT GENE EXPRESSION" PubDate 03/15/2018; Inventors Gao C, Wang Y, Zhang Y, Liu J, Zhang K; Assignee CAS Inst. Genetics & Developmental Biology.
9.[特許]CRISPR技術による療法に向けた両親媒性ナノ粒子
  • US 2018/0078657 A1 "AMPHIPHILIC NANOPARTICLES FOR DELIVERY OF #CRISPR BASED THERAPY" PubDate 03/22/2018; Inventors Ghoroghchian PP, Xiao H, Qi R, Li T; Assignee MIT.
10.[特許]バーコードを利用してプール型ゲノム擾乱スクリーン(CRISPR技術)において一細胞レベルで表現型と遺伝型を同定
US 2018/0080019 A1 "ENCODING OF DNA VECTOR IDENTITY VIA ITERATIVE HYBRIDIZATION DETECTION OF A BARCODE TRANSCRIPT" PubDate 03/22/2018; Inventors Blainey P, Feldman D; Assignee Broad Inst, MIT.

11.[特許]血管の自己組織化を目的とする内皮細胞改変(CRISPR技術)
US 2018/0066253 A1 "METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODIFYING ENDOTHELIAL CELLS"  PubDate 03/08/2018; Inventors Pober J, Abrahimi P; Assignee Yale U.