１．[特許]耐熱性Cas9ヌクレアーゼ
  • "Thermostable cas9 nucleases" US20180171314. PubDate: 06/21/2018. Inventors: van der Oost J, Daas MJA, Kengen SWM, de Vos WM. Assignee:Purac Biochem B.V. (Gorinchem, NL). 
  • 50-100°Cの温度域でDNA切断活性を示すCas9タンパク質またはポリペプチド(アミノ酸配列での同一性77%までカバー)
  • 関連van der Oost論文："Characterizing a thermostable Cas9 for bacterial genome editing and silencing" Nat Commun. 2017 Nov 21.
２．[特許]Cas9ゲノム編集効率向上法
  • "Methods for increasing cas9-mediated engineering efficiency" US9970030. PubDate: 05/15/2018. Inventors: Cameron PS, Haurwitz RE, May AP, Nye CH, van Overbeek M. Assignee: Caribou Biosciences, Inc. (Berkeley, CA, US) 
  • オフターゲットのDSBの低減そしてまたはDSBのHDRを亢進する手法；Cas9-gRNA(オンターゲット)とdCas9-gRNA(オフターゲット)の組み合わせ；S pyogenes, S. thermophilus, S. aureus, N. meningitides 
３．[特許]フラタキシン発現を亢進するCRISPR-Casシステムとフリードライヒ運動失調症療法などへの応用
４.[レビュー]将来、ゲノム編集による耐病性付与が、作物育種の標準になる
  • [出典]"CRISPR Crops: Plant Genome Editing Toward Disease Resistance" Langner T, Kaman S, Belhaj K. Annu Rev Phytopathol 2018 Jul 5.
  • 植物ゲノム編集を'民主化'したCRISPR-Cas9技術の最近の開発動向と耐病性向上への応用。
５．トウモロコシ標的突然変異導入におけるCRISPR-Cas9とCas12aの活性と特異性を比較
  • Activities and specificities of CRISPR-Cas9 and Cas12a nucleases for targeted mutagenesis in maize. Lee K [..] Qi Y, Wang K. Plant Biotechnol J. 2018 Jul 4.
  • 双方のヌクレアーゼが認識するglossy2遺伝子でベンチマーク；SpCas9-gRNAとLbCas12a-crRNAをアグロバクテリウム法で胚に導入；オンターゲット編集効率とオフターゲット編集率をT0世代とT1世代で比較し、SpCas9を推奨し、Cas12aはさらなる最適化が必要と結論
６．[プロトコル]植物のプロトプラストとカルス培養法およびCRISPR/Cas9技術によるゲノム編集
７．全ゲノムシーケンシング (WGS)で、Cas9とCpf1(Cas12a)に起因するイネ・ゲノム・オフターゲット編集は極めて稀であることを確認
  • [出典]"A large-scale whole-genome sequencing analysis reveals highly specific genome editing by both Cas9 and Cpf1 (Cas12a) nucleases in rice" Tang X, Liu G, Zhou J [..] Qi Y, Zhang T, Zhang Y. Genome Biol 2018 Jul 4.
  • 植物におけるCas9のオフターゲット編集および高等生物におけるCas12aのオフターゲット編集を、初めてWGSで解析；変異のほとんどが組織培養の過程で発生(個体あたり102-148 SNVs, 32-83 indels)；テストした12種類のCas9 sgRNAsと3種類のCPf1 crRNAsのうちT0世代でオフターゲット編集が発生したのは１種類のsgRNAだけ；T1世代において、Cas9またはCpf1の継続的発現に起因する新規変異は非検出 (下図 原論文Fig.1 実験デザインとワークフロー)Cas9＆Cpf1 WGS
８．CRISPR-Cpf1による放線菌(Streptomyces)の多重ゲノム編集と転写抑制
  • [出典]"CRISPR-Cpf1 assisted multiplex genome editing and transcriptional repression in Streptomyces" Li L, Wei K, Zheng G, Liu X, Chen S, Jiang W, Lu Y. Appl Environ Microbiol 2018 Jul 6.
  • Streptococcus pyogenes由来のSpCas9は、リード化合物探索源として有用な放線菌のゲノム編集への利用には、産業上有用な放線菌株に対する毒性や複数遺伝子座を標的とする際に必要な複雑な発現コンストラクト構築などからの限界がある。中国上海の研究チームは今回、Francisella novicida由来Cpf1 (FnCpf1)による効率的ゲノム編集を実現した：Streptomyces coelicolorにおいてテンプレートを併用したHDRを介して１遺伝子また２遺伝子の効率75-95%の精密な修復；テンプレートを併用しない場合、NHEJを介したDSB修復に由来するランダムな長さのDNA削除；DNaseで不活性化したCpf1 (ddCpf1)に基づくCRISPRiとcrRNAアレイによる複数遺伝子の転写抑制；特定の放線菌株においてSpCas9では実現しなかったHDRを介した遺伝子削除実現
  • [関連crisp_bio記事]CRISPRメモ_2018/06/11-1: 1. Cpf1を介した多重ゲノム編集により、院内下痢症の主因病原菌であるディフィシル菌 (C. difficile)の発症機序と生理作用を解明；2. CRISPR/dCas9を介して放線菌 (Streptomyces)における遺伝子発現を多重抑制
９．CRISPR/Cas9のHDRとCasPER:error-prone PCRによる変異配列ドナー・ライブラリーによる指向性進化法'CasPER'の開発と検証
  • [出典]"CasPER, a method for directed evolution in genomic contexts using mutagenesis and CRISPR/Cas9" Jakočiūnas T, Pedersen LE, Lis AV, Jensen MK, Keasling JD. Metab Eng. 2018 Jul 5.
  • CasPERはCas9-mediated protein evolution reactionから命名；指向性進化法で得られる変異体からのスクリーニングに基づいて、Saccharomyces cerevisiaeのメバロン酸経路上の２種類の必須酵素を改変し、イソプレノイドの収量11倍に
10．結核菌のタイプIII-A CRISPR/CasシステムのcrRNAとその成熟機構は独特である
  • Mycobacterium tuberculosis type III-A CRISPR/Cas system crRNA and its maturation have atypical features. Wei W [..] Bi L. FASEB J. 2018 Jul 6.