CRISPRメモ_2019/02/10_1 (機構, 遺伝子治療, スクリーン, 送達, モデル作出など7件) : crisp

1. 癌細胞の特徴であるゲノム再編成がCRISPR-Cas9遺伝子編集実験に及ぼす影響

[出典] "Structural rearrangements generate cell-specific, gene-independent CRISPR-Cas9 loss of fitness effects" Gonçalves E [..] Garnett MJ. Genome Biol. 2019-02-05.

Wellcome Sanger Instituteの研究チームは今回、先行研究(*)を受けて今回、250種類の癌細胞を対象とするCRISPR-Cas9 KO実験を行い、遺伝子の種類には因らず、癌細胞の種類と倍数性に依存して、タンデムリピートまたは散在リピートによる増幅が細胞の適応性に致命的であることを見出した。一方で、染色体まるごとの重複は細胞適応度にはほとんど影響しないことも見出した。
(*) CRISPRメモ_2018/05/30 [第１項] 縦列重複の増幅 (コピー数増加)が、癌細胞必須遺伝子のCRISPR-Cas9ドロップアウトスクリーンに偽陽性をもたらす

２. Cas9とsgRNAの細胞質マイクロインジェクションがもたらすモザイク現象

[出典] "Effects of concentration of CRISPR/Cas9 components on genetic mosaicism in cytoplasmic microinjected porcine embryos" Tanihara F [..] Otoi T. J Reprod Develop. 2019-02-05.

徳島大学の研究チームは今回、ブタの卵母細胞または受精卵にCas9タンパク質とsgRNAをマイクロインジェクションした胚盤胞に現れるモザイク現象と、Cas9/sgRNAの量と注入タイミングとの相関を解析した結果、体外受精 (IVF)前の卵母細胞へのCIよりも、IVF後の受精卵へのCIを推奨

３. [テキスト]CRISPR/Cas9による鎌状赤血球症 (SCD)の遺伝子治療の現状、期待そして課題

[出典] "CRISPR/Cas9 for Sickle Cell Disease: Applications, Future Possibilities, and Challenges" Demirci S, Leonard A, Haro-Mora JJ, Uchida N, Tisdale JF. Advances in Experimental Medicine and Biology. 2019-02-05.

4. ムコ多糖症 (MPS) I型治療に有用な酵素IDUAの長期間発現をマウスモデルで実現

[出典] "CRISPR/Cas9 mediated insertion of α-L-iduronidase (IDUA) and anti-PE receptor in B-lymphocytes for selective activation into long-lived plasma cells for sustainable IDUA expression" Moriarity B. Mol Genet Metab Rep. 2019-Feb.

CRISPR/Cas9 HDRを介して Bリンパ球にてα-L-イズロニダーゼ (IDUA)とフィコエリスリン(PE)を共発現させ、細胞表面発現PEで選別することで、IDUA酵素を大量に分泌し長期間安定な形質細胞集団を得て、マウスモデルに移植
IDUA関連crisp_bio記事：CRISPRメモ_2018/10/01 [第１項] ヒト造血幹細胞ゲノム編集によりムコ多糖症 (MPS) I型の表現型修復を実現；CRISPRメモ_2018/09/02 [第１項] CRISPR/Cas9システムによるムコ多糖症 I型モデルマウスのin vivoゲノム編集

5. CRISPR -Cas9システムを帯びたリポソーム・ベクターをムコ多糖症 II 型モデルマウス鼻腔から送達

[出典] "Intranasal delivery of the CRISPR-Cas9 system for gene editing in MPS II mice" Pimentel L [..] Baldo G. Mol Genet Metab Rep. Feb 2019.

CRISPR/Cas9システムによるイズロン酸-2-スルファターゼ (IDS)活性化を試み、CRISPR/Cas9システムを鼻腔から送り込むことで、心臓、肺および脳の臭球でのIDSの活性が亢進することを確認。ただし、臭球以外の脳神経系では顕著な活性見られなかった。

6. アセトアミノフェンの肝細胞毒性に対する耐性あるいは感受性をもたらす遺伝子をゲノムワイドCRISPR-Cas9スクリーンで同定

[出典] "Identification of Novel Regulatory Genes in APAP Induced Hepatocyte Toxicity by a Genome-Wide CRISPR-Cas9 Screen" Shortt K, Heruth DP, Zhang N et al. Sci Rep. 2019-02-04.

高分化型ヒト肝癌由来HuH7細胞株を対象とするスクリーニング

7. CRISPR-Cas9によりコモンマーモセットのESCsと初期胚への効率が良く安定したノックインを実現

[出典] "Robust and efficient knock-in in embryonic stem cells and early-stage embryos of the common marmoset using the CRISPR-Cas9 system" Yoshimatsu S [..] Shiozawa S, Okano H. Sci Rep. 2019-02-06.