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科学分野の比較的新しい論文と記事を記録しておくサイト: 主に、CRISPR生物学・技術開発・応用 (ゲノム編集, エピゲノム編集, 遺伝子治療, 分子診断/代謝工学, 合成生物学/進化, がん, 免疫, 老化, 育種 - 結果的に生物が関わる全分野) の観点から選択し、時折、タンパク質工学、情報資源・生物資源、新型コロナウイルスの起源・ワクチン・後遺症、機械学習・AIや研究公正からも選択

(創薬等PF・構造生命科学ニュースウオッチ 2015/09/05)CRISPR関連文献メモ_2015/09/05
  • Wulan Deng (Janelia Research Campus, HHMI); Robert H. Singer (Albert Einstein College of Medicine)
  • 従来のDNA FISHは、DNAの熱変性、BACプローブ利用による分解能の限界、高価なオリゴ・プローブといった課題が残されていた.
  • dCas9のN末端にHisタグを、C末端にHaloタグを融合させ、Haloリガンドを利用して、dCas9を蛍光標識 (CASHFISHは"Cas9-mediated fluorescence in situ hybridization"からの命名).固定化したマウス胎仔線維芽細胞とHeLa細胞で検証.
  • 種々のsgRNAを設計して、動原体周囲の反復DNAエレメント、動原体、グアニンに富んだテロメアならびにコード遺伝子座の標識を実現.
  • dCas9と任意の遺伝子座を標的とするsgRNA群を組み合わせることで、非反復的なDNA配列の可視化を実現.
  • dCas9/sgRNA複合体は安定であり、標的DNAに高い親和性で結合し、複数の標的を連続的あるいは同時に狙うことが可能.
  • 多色のdCas9/sgRNAを使うことによって、標的遺伝子座を細胞内で多色標識可能.
  • CASFISHの反応は高速 (数分~1時間)であり、一次組織断片の解析に適用可能.

 論文→Wulan Deng et al. "CASFISH: CRISPR/Cas9-mediated in situ labeling of genomic loci in fixed cells." Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. Published online 2015 Aug 31.

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