2019-04-03 関連論文書誌情報を追加: "Staphylococcus aureus Cas9 is a multiple-turnover enzyme" Yourik P, Fuchs RT, Mabuchi M, Curcuru JL, Robb GB. RNA. 2019 Jan;25(1):35-44. Online 2018-10-22.
（創薬等PF・構造生命科学ニュースウオッチ 2015/04/02）CRISPR関連文献メモ_2015/04/02
[出典] "In vivo genome editing using Staphylococcus aureus Cas9" Ann Ran F et al. Nature. Published online 2015-04-01; [Nature NEWS] "Mini enzyme moves gene editing closer to the clinic- Discovery expands potential CRISPR toolbox for treating genetic diseases in humans" Heidi Ledford. Nature 2015 Apr 1;520(7545):18
（創薬等PF・構造生命科学ニュースウオッチ 2015/04/02）CRISPR関連文献メモ_2015/04/02
[出典] "In vivo genome editing using Staphylococcus aureus Cas9" Ann Ran F et al. Nature. Published online 2015-04-01; [Nature NEWS] "Mini enzyme moves gene editing closer to the clinic- Discovery expands potential CRISPR toolbox for treating genetic diseases in humans" Heidi Ledford. Nature 2015 Apr 1;520(7545):18
- 体細胞ゲノム編集を臨床に応用するためには、オフターゲット効果の回避に加えて、標的とする細胞群に的確に送達する手段が必須である．担体(vehicle)として、安全性が高く標的細胞の種類に応じて適切な血清型を選択できるアデノ随伴ウイルス(adeno-associated virus, AAV）が魅力的である．しかし、現在良く利用されているStreptococcus pyogenes Cas9 (SpCas9)の大きさ〜4.2kbは、sgRNAや発現/制御エレメントの付加を考えると、AAVの"積載量上限"〜4.5kbに比べて大きすぎる．
- Broad InstituteのFeng Zhang等は、これまでに、Streptococcus thermophilus のCas9（〜3.3kb）や短縮したSpCas9を試用してきたが、それぞれ一長一短が有った．今回、Feng Zhang等は、数百種類のバクテリア由来のCas9オーソログ600種類の配列を解析し、AAVにパッケージして成熟細胞へ送達可能な小型Cas9を同定した。
- 小型なCas9オーソログを分析し、 Staphylococcus aureus のCas9(SaCas9)が、SpCas9より1kb以上短くかつSpCas9と同等のゲノム編集効率を示すことを見出した．
- SaCas9と一本のsgRNAのカセットを一本のAAVベクターにパッケージし、マウス肝臓中のコレステロール調節遺伝子Pcsk9 を標的として尾静脈注射したところ、投与後１週間以内で、Pcsk9 遺伝子の40%以上が変異し、血中Pcsk9と全コレステロール量も大きく減少した．１〜４週間の観察期間中、マウスに対する副作用は見られなかった．
- さらに、SaCas9とSpCas9の機能をBLESS(direct in situ breaks labelling, enrichment on streptavidin and next-generation sequencing)法によりゲノムワイドで評価し、SaCas9によるin vivo ゲノム編集が高効率で高選択性であることを確認した．
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