1. CRISPRiによって脳in vivoで特異的かつ効率的に遺伝子サイレンシング
[出典] "CRISPR interference-based specific and efficient gene inactivation in the brain" Zheng Y, Shen W [..] Mi S, Yao J. Nat Neurosci. 2018-02-05.
  • 清華大学を中心とする中国と米国の研究グループの2018年発表論文 (SpCas9の免疫原性低減論文 lに引用されていた論文としてここに採録)
  • ニューロンにおける神経伝達物質放出に必須の一連の遺伝子の不活性化を目的としてCRISPRiを構築し、標的遺伝子全てについて、CRISPRiによって発現をほぼ完全に抑制するに至るまでノックダウン可能なことを示した。オフターゲット作用は非検出;条件付きCRISPRiによって、シナプトタグミンI (Syt1)を標的とする条件付きCRISPRiにより、マウス海馬の歯状回における興奮性/抑制性のバランス (excitatory to inhibitory balance, I/E balance)調節を実現;5遺伝子の多重ノックダウンも実現
2. 巣状分節性糸球体硬化症患者に見られるPAX2転写因子のヘテロ型G189Rミスセンス変異をCRISPR-Cas9を介したHDRにより修復
[出典] "CRISPR-Cas9-Mediated Correction of the G189R-PAX2 Mutation in Induced Pluripotent Stem Cells from a Patient with Focal Segmental Glomerulosclerosis" Trionfini P [..] Tomasoni S. The CRISPR Journal. 2019-04-18.
  • 相同組み換え効率を促進するL755507も加えて、HDRを介した修復を実現し、iPSCsから分化誘導した腎臓の糸球体上皮細胞 (ポドサイト)の運動を回復
3. Cas9/RecAを介した相同組み換え修復 (HDR)パスウエイを介したin vivoゲノム編集により、光受容体の変性を修復
[出典] "In vivo genome editing rescues photoreceptor degeneration via a Cas9/RecA-mediated homology-directed repair pathway" Cai Y, Cheng T, Yao Y [..] Zhang M, Qiu Z, Xue T. Sci Adv. 2019-04-17.
  • Cas9による疾患モデル動物の作出が進んできたが、HDRを介したモデル作出は殆ど見られない。HDRの効率が極めて低いためである。中国科学技術大学などの中国科学院の研究グループは今回、Cas9による2本鎖DNA切断と、バクテリアのリコンビナーゼ A  (RecA)によるHDR亢進を介して、網膜色素変性モデルであるrodless (rd1)マウス出生後に、Pde6b変異を精密に修復;桿体細胞と錐体細胞を長期間維持し、桿体細胞におけるPDE6Bの発現を回復し、rd1マウスの視力を回復
4. Cas9-sgRNAを利用して、臨床現場で必要なターゲットシーケンシングの効率的サンプル調整法を開発
[出典] "A novel CRISPR/Cas9 associated technology for sequence-specific nucleic acid enrichment" Stevens RC [..] Shuber AP.PLoS One 2019-04-18
  • 多重並列シーケンシングにより大量の配列データ獲得が可能になったが、臨床現場では、コストとスループットの観点から、ターゲットシーケンシングが望まれる。Genetics Research LLCとUniversity of New Hampshireの研究グループは、ターゲットシーケンシングの対象とするゲノム領域を、5'末端と3'末端を標的とする一対のCas9/sgRNAにより、細胞内のエンドヌクレアーゼによる分解から保護し、5'末端ー3'末端の外側のゲノムDNAの分解を許す"Negative Enrichment"法を開発した (Fig. 1引用下図参照)。enrichment
  • この手法により、in vitro増幅やDNA断片化を経由することなく、長い(>10 kb)二本鎖DNAを天然の状態でシーケンシング解析することが可能になった。
5. イネにおいて、CRISPR/Cas9の標的遺伝子の機能喪失は、必ずしも表現形質として表出しないことを、同定
[出典] "Different knockout genotypes of OsIAA23 in rice using CRISPR/Cas9 generating different phenotypes" Jiang M, Hu H, Kai J [..] Yang S, Zhang X. Plant Mol Biol. 2019-04-19.
6. CRISPR/Cas9ゲノム編集において、gRNAを一時的に発現させることで、gRNA送達を単純化
[出典] "gRNA-transient expression system for simplified gRNA delivery in CRISPR/Cas9 genome editing" Easmin F [..] Harashima S. J Biosci Bioeng. 2019-04-19.
  • 崇城大学の研究チームは今回、5~6時間でプロモーターとgRNAを帯びたDNAフラグメントの作出とDNAモジュールとしての酵母細胞への送達・形質転換までを実現可能とするguide RNA-transient expression system (gRNA-TES)を開発 (これまでのプラスミド送達をベースとする手法では3~4日を要していた);150-kb ~ 500 -kbの置換を67-100%の効率で実現
7.  CRISPR/Cas9によるdnd1ノックアウトによりコチョウザメを不妊化し、チョウザメの代理親を作出
[出典] "Dnd1 Knockout in Sturgeons By CRISPR/Cas9 Generates Germ Cell Free Host for Surrogate Production" Baloch AR et al. Animals. 2019-04-17.
  • 乱獲などの非生物的要因に加えて生物的要因により絶滅の危機にあるチョウザメは性成熟に20~25年を要することから、生殖周期が早いコチョウザメを代理親とする繁殖法が模索されている。

8. [特許] DTECTRシステムに相当する特許
[出典] US10253365 B1 "Type V CRISPR/Cas effector proteins for cleaving ssDNAs and detecting target DNAs"
  • 公開日 2019-04-09. 発明者 Doudna JA, Chen JS, Harrington LB, Ma E. 権利者 U. California
9. [特許] CRISPR-Casシステムによる発がんモデル作成
[出典] US20190106710 A1 "Oncogenic Models Based on Delivery and Use of the CRISPR-Cas Systems, Vectors and Compositions"
  • 公開日 2019-04-11. 発明者 Zhang F, Ebert BL, Heckl D. 権利者 Broad Inst, MIT, Brigham and Women's Hospital
10. [レビュー] CRISPR/Cas9の高分子ナノ粒子送達による病原菌感染の防止と治療
[出典] REVIEW "A CRISPR/Cas9 based polymeric nanoparticles to treat/inhibit microbial infections" Verma R, Sahu R, Singh DD, Egbo TE. Semin Cell Dev Biol. 2019-04-12

11. [レビュー] 寄生虫学におけるCRISPR
[出典] REVIEW "CRISPR in Parasitology: Not Exactly Cut and Dried!" Bryabt JM et al. Trends Parasitol. 2019-04-18.
  • Institut Pateurで開催されたシンポジウムからのレポート:リーシュマニア、マラリア原虫、トリパノソーマ、および、ハマダラカを含む媒介昆虫における遺伝子発現調節、ハイスループット変異体スクリーニング、マーカーフリーの遺伝子編集、遺伝子ドライブなど