1. CRISPR/Cas9システムを卵母細胞にマイクロインジェクションすることで、大幅にモザイクを抑制
[出典] Strategies to reduce genetic mosaicism following CRISPR-mediated genome edition in bovine embryos. Lamas-Toranzo I [..] Bermejo-Álvarez P. Sci Rep. 2019-10-17.
- INIA (マドリッド)の研究グループが、Cas9 mRNAの形式にしてもRNPの形式にしても、従来のプロトコルである授精後20時間 (20 hpi)の胚へのマイクロインジェクションに替えて卵母細胞にマイクロインジェクション (0 hpiに相当)することで、モザイクを100%から~10%へと低減可能なことを示した (Table 1/3引用下図参照)。
2. [レビュー] 非人類霊長類 (Nonhuman primates, NHPs)のCRISPR/Cas9ゲノム編集
[出典] REVIEW: CRISPR/Cas9-mediated genome editing in nonhuman primates. Kang Y, Chu C, Wang F, Niu Y. Disease Models & Mechanisms. 2019-10-16.
- 2010年のサル免疫不全ウイルスにより作出した緑色蛍光トランスジェニックアカゲザルの論文 [1]および2014年のCRISPR/Cas9による初のサル遺伝子編集論文[2]の筆頭著者であったYuyu Niuを責任著者とする昆明理工大学の研究チームによるレビューである。
- Table 1に、[2]から実験動物研究所の佐々木えりか等によるマーモセット遺伝子ターゲッティング[3]まで、CRISPR/Casシステムによるサルとマーモセットの遺伝子ノックアウトとノックインの12例がまとめられ、オフターゲットとモザイク効果の課題が論じられている。
[参考論文・crisp_bio記事]
- Transgenic rhesus monkeys produced by gene transfer into early-cleavage–stage embryos using a simian immunodeficiency virus-based vector. Niu Y, You Y, Bernat A [..] Savatier P, Zhang K, Zhou Q, Weizhi J. PNAS. 2010-10-10.
- Generation of Gene-Modified Cynomolgus Monkey via Cas9/RNA-Mediated Gene Targeting in One-Cell Embryos. Cell 2014-01-30.
- 2019-09-08 CRISPR/Cas9によるマーモセット遺伝子ターゲッティングの効率とモザイク効果
3. [研究資源] CRISPR-Cas9によるHDRを介して、ヒトiPSC株KSCBi005-A-3にて、β細胞特異的転写因子を直接調節するPDX1のC末端をEGFPにて標識
[出典] Generation of a PDX1–EGFP reporter human induced pluripotent stem cell line, KSCBi005-A-3, using the CRISPR/Cas9 system. Lee Y [..] Kwak S, Koa SK. Stem Cell Research. 2019-10-16.
4. I-E CRISPR-Cascadeを植物の遺伝子活性化に活用する
[出典] The repurposing of type I-E CRISPR-Cascade for gene activation in plants. Young JK, Gasior SL [..] Barrangou R. Commun Biol. 2019-10-18.
ダウ・デュポンのアグリカルチャー事業部門Corteva Agriscience™のチームにNorth Carolina State UniversityのRodolphe Barrangouが加わった研究グループは、Streptococcus thermophilus由来のタイプI-E Cascade複合体 (SthCascade (CasA-CBF1, CasB, CasC, CasD-CBF1, and CasE-CBF1)により、dCas9 (dCas9-CBF1)と同等の遺伝子活性化を、トウモロコシにおいて実現した (Fig. 1とFig. 3引用左右の下図参照)。
ダウ・デュポンのアグリカルチャー事業部門Corteva Agriscience™のチームにNorth Carolina State UniversityのRodolphe Barrangouが加わった研究グループは、Streptococcus thermophilus由来のタイプI-E Cascade複合体 (SthCascade (CasA-CBF1, CasB, CasC, CasD-CBF1, and CasE-CBF1)により、dCas9 (dCas9-CBF1)と同等の遺伝子活性化を、トウモロコシにおいて実現した (Fig. 1とFig. 3引用左右の下図参照)。
[Cascadeの利用に関するcrisp_bio記事]
5. 糸状菌のCRISPRゲノム編集ツールの実用ガイド
[出典] Practical guidance for the implementation of the CRISPR genome editing tool in filamentous fungi. Kwon MJ [..] Meyer V. Fungal Biol Biotechnol. 2019-10-17 ; [Correction to:] Practical guidance for the implementation of the CRISPR genome editing tool in filamentous fungi. Fungal Biol Biotechnol (2019) 6: 20.
- SpCas9、FnCpf1またはAsCpf1を、RNPまたはプラスミドで送達することで、Thermothelomyces thermophilus (旧名 Myceliophthora thermophila)のポリケチド合成酵素、アルカリプロテアーゼ、SNAREタンパク質および転写因子 (ptf1)を単一または多重な編集を実現し、編集効率がエフェクタと標的に依存することを見出した。また、マイクロタイタープレート上での遺伝子編集への小型化も実現した。
6. CRISPR/Cas9による真菌性角膜炎の原因菌Fusarium solani var. petroliphilumの責任遺伝子同定の可能性
[出典] CRISPR/Cas9-Mediated Gene Replacement in the Fungal Keratitis Pathogen Fusarium solani var. petroliphilum. Lightfoot JD, Fuller KK. Microorganisms. 2019-10-16.
University of Oklahoma Health Sciences Centerの研究チームは今回、 Cas9-sgRNAのRNPによるMMEJ過程を介して、ウラシル要求性に関連するura3遺伝子オーソログをモデルとして、ハイグロマイシン耐性遺伝子への置換を試み、成功したことから、CRISPR/Cas9技術によるフザリウム菌の機能ゲノミクスが可能とした。
7. Cas9ニッカーゼと一対のsgRNAsを帯びたオールインワン・ベクタにより、細胞性粘菌キイロタマホコリカビのDNA領域欠失と精密な点変異導入を実現
[出典] Generation of deletions and precise point mutations in Dictyostelium discoideum using the CRISPR nickase. Iriki H, Kawata T, Muramoto T. PLos One. 2019-10-17.
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