[出典] Functional profiling of single CRISPR/Cas9-edited human long-term hematopoietic stem cells. Wagenblast E [..]  Dick JE, Lechman ER. Nat Commun. 2019-10-18. 

　ヒト造血システムにおいて、自己複製能と多分化能を帯びた長期 (Long-Term)造血幹細胞 (LT-HSCs)は 、CD34陽性造血幹細胞・前駆細胞 (HSPCs)集団の0.1-1%に過ぎないが 一生にわたる血液細胞の源であり、それゆえ、遺伝性血液疾患の治療や再生医療の標的とされてきた (ヒト造血幹細胞の分化過程についてSupplementary Figure 1引用下図参照)。

　近年、CRISPR/Cas9技術により、NHEJを介したCD34陽性HSPCsの遺伝子ノックアウト効率80-90%、HDRを介したノックイン効率20%およびrAAV9で導入した蛍光レポータとFACSによるCRISPR/Cas9編集細胞のエンリッチメントが実現されてきた。HSPCsのごく一部であるLT-HSCsについても、CRISPR/Cas9で編集したヒトCD34陽性HSPCsを異種移植し16週に至るまで解析した実験から、LT-HSCsの遺伝子編集が可能なことが示唆された。しかしこれは、膨大な数のCD34陽性HSPCsから出発した実験であり、個々のLT-HSCsの分化と増殖を解析するまでの分解能には至らなかった。

　Princess Margaret Cancer Centre (トロント)とThe Jackson Laboratoryなどの研究グループは今回、不均一なCD34陽性HSPCs内でのLT-HSCsのCRISPR/Cas9遺伝子編集に替わり、LT-HSCsだけを対象とするCRISPR/Cas9によるNHEJまたはHDRを介した遺伝子編集と、それに続く、in vitroでのシングルセルの分化とマウスへの'near clonal'異種移植の長期間にわたる分析を実現した。