1. CRISPR技術によるin vivoでのエンハンサー機能解析
[出典] "A CRISPR approach to elucidate the role of enhancers during development and disease" Le Bras A. Lab Anim (NY) 2020-02-17.  
  • "Interrogation of Enhancer Function by Enhanced CRISPR Epigenetic Editing" Li K, Liu Y [..] Xu J. Nat Commun 2020-01-24. をハイライト;  crisp_bio 2019-09-10 エンハンサー機能解析ツールenCRISPRaとenCRISPRienCRISPRa:i
2. バイオバンクの腸管オルガノイド・バイオバンクと、ABEにより嚢胞性線維症 (CF)のナンセンス変異を修正
[出典] "CRISPR-Based Adenine Editors Correct Nonsense Mutations in a Cystic Fibrosis Organoid Biobank" Geurts MH, de Poel E [..] Beekman JM, Clevers H. Cell Stem Cell 2020 Feb 13
  • Hubrecht InstituteやUniversity Medical Centerを主とする研究グループは今回、腸管オルガノイド・バイオバンクの構築と、このバイオバンクを利用したABEによる病因変異修復の実証を、Cell Stem Cell誌から報告した。
  • CFTRタンパク質の発現を欠いているCF患者664名に由来し、CFTR遺伝子変異154種類をカバーしている腸管オルガノイド・バイオバンクを構築した。
  • 4種類のオルガノイドを選択し、A:TをG:Cへ変換する塩基編集ツールABE、SpCas9-ABE (PAM: NGG)とxCas9 (PAM: NGN)、による変異修復を試みたところ、全例について、遺伝子変異と機能が修復された。
  • また、2名の患者由来のオルガノイドから遺伝子修復が実現したクローンについて、オフターゲット編集が発生していなかったことWGSで確認した。
3. CRISPR/Cas9により2種類の嚢胞性線維症 (CF)モデルラット系統 (Phe508del (ΔF508)変異とCFTR KO)を作出し、フェノタイプを比較解析 
[出典] "Phenotypic characterization and comparison of Phe508del and cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) knockout rat models of cystic fibrosis generated by CRISPR/Cas9 gene editing" McCarron A [..] Donnelley M. Am J Pathol 2020-02-18
  • University of Adelaideなどオーストラリアの研究グループは今回、2種類のCFモデルラットの上気道の電気生理学的機能、RNAscope in situ ハイブリダイゼーションとqPCRにより測定したCFTR mRNA発現、免疫組織化学により同定した気道におけるCFTRタンパク質の局在、ならびに、一連の組織の組織学的解析結果を比較し、双方とも、ヒトCF症の広範な症状を再現するとした。
4. CRISPR/Cas9により3-メルカプトピルビン酸硫黄転移酵素(3MST)欠損ゼブラフィッシュを作出し、3MSTの機能を同定
[出典] "Generation and Characterization of a CRISPR/Cas9 - Induced 3-mst Deficient Zebrafish" Katsouda A [..] Papapetropoulos A, Beis D.Biomolecules 2020-02-17
  • 3-mstがレドックス恒常性維持に重要であり、また、再生過程への関与を示唆する結果を得た。
5. ブタにおいてもアクチビンAがNanogを制御する
[出典] "A cytokine screen using CRISPR-Cas9 knock-in reporter pig iPS cells reveals that Activin A regulates NANOG" Xu J [..] Han J. Stem Cell Res Ther 2020-02-18
  • 中国農業大学と中山大学の研究グループが、CRISPR-Cas9 HDRを介してNANOGにtdTomatoと3xFLAGタグをノックインしたブタiPSCを選別・樹立し、サイトカインとサイトカイン阻害剤によるスクリーンを経て、マウスとヒトと同様にブタにおいて、アクチビンA/SMADパスウエイが、NANOG発現を直接制御することを同定した。
6. Oncomes (癌細胞が分泌する細胞外小胞)に含まれるmoonlighting MMP3 (マトリックスメタロプロテアーゼ)が癌細胞の転移を促進し遠位細胞に発癌性をもたらし、結合組織増殖因子2 (CCN2/CTGF)プロモーターのトランス活性化する
[出典] "Extracellular Oncosomes Rich in Moonlighting Metalloproteinase (MMP3) Are Transmissive, Pro-Tumorigenic, and Induces Cellular Communication Network Factor 2 (CCN2/CTGF): CRISPR against Cancer" Okusha Y, Eguchi T  et al. Preprints 2020-02-19
  • LuM1大腸癌細胞の遺伝子発現やマウスでの発癌性などの解析結果に加えて、MMP3のCRISPR/Cas9ノックアウトが抗腫瘍性をもたらしCCN2/CTGFレベルを低減することから、表題の結論に達した。
7. CRISPR-ddAsCpf1システムによる細胞外電子移動 (extracellular electron transfer, EET)の亢進を介して、金属イオンを還元するシュワネラ菌の汚染物質分解性能を向上
[出典] "Rediverting Electron Flux with an Engineered CRISPR-ddAsCpf1 System to Enhance Pollutant Degradation Capacity of Shewanella oneidensis" Li J [..] Yu HQ. Environ Sci Technol 2020-02-16
  • [注] Cpf1はCas12aの旧名; ddCpf1はDNase-dead Cpf1変異体の意 [*] CRISPRメモ_2018/11/26 [#1] dCpf1による転写調節の特性を大腸菌にて検証
  • CRISPR-ddAsCpf1によってGFPレポーター遺伝子の発現の100%抑制を確認;ddAsCpf1により競合する電子移動関連タンパク質をコードする遺伝子をスクリーンし、EETの亢進の標的になりえる7遺伝子を同定; 有機汚染物質メチルオレンジと重金属であるクロムの還元亢進を確認
  • 今回開発したEET亢進法を著者らはSTARと命名
8. ゼブラフィッシュにおけるCRISPR-Cas9 HDRの効率向上
[出典] "Synthetic CRISPR/Cas9 reagents facilitate genome editing and homology directed repair" DiNapoli SE,  Martinez-McFaline R, Gribbin CK [..] Houvras Y. Nucleic Acids Res 2020-02-17
  • Weill Cornell Medical College, Harvard Medical SchoolならびにU Chicagoの研究グループは、HDR効率のin vivoアッセイ法を開発した上で、合成gRNA、直鎖状dsDNAテンプレートおよび組換えCas9の組み合わを同定し、表題を実現した。
  • その結果、蛍光色素の多重な遺伝子座へのノックイン、ノックイン・アレルの伝達効率14-25%、および、発生過程の細胞系譜追跡、を実現した。
9. [レビュー] CRISPR-Cas9の活性化を調節するアロステリックな分子機構
[出典] "Allosteric regulation of CRISPR-Cas9 for DNA-targeting and cleavage" Zuo Z (上海工程技術大学), Liu J (U North Texas Health Science Center). Curr Opin Struct Biol 2020-02-15
  • 表題分子機構を概観し、その分子機構に基づく、Cas9そしてまたはsgRNAの改変や、外部刺激によるスイッチを介したCas9ゲノム編集の制御法も概観