死せるRNAs (dRNAs)オフターゲットを走らす* : crisp

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[出典] "Suppression of unwanted CRISPR-Cas9 editing by co-administration of catalytically inactivating truncated guide RNAs" Rose JC, Popp NA [..] Maly DJ, Fowler DM. Nat Commun 2020-06-01.

　UWとUC Berkeleyの研究グループは今回、CRISPRシステムによるゲノム編集において、sgRNAsと共に短縮し不活性化したdead RNAs (dRNAs)をデリバリーすると、オンターゲットでの編集効率を損なうことなく、オフターゲット・サイトでの編集を排除できることを示した (Fig. 1引用左下図参照)。

　また、dRNAsは、HDRを介して修復されたオンターゲット領域の再切断も排除し、ひいては、オンターゲットへのindelsを排除し、スカーレス・ノックインを実現した (Fig. 6引用下図参照)。この手法は多重化可能であり、高精度版Cas9 (eSpCas9, Cas9-HF1, or HypaCas)にも適合する。以上、HEK293T細胞とU2OS細胞、および、誘導性Cas9 (iCas9)を利用してhESCで実証。