[出典] "Cell Surface Receptor Identification Using Genome-Scale CRISPR/Cas9 Genetic Screens" Sharma S, Wright GJ. J Vis Exp 2020-06-06. https://doi.org/10.3791/60803 [著者所属] ]Wellcome Trust Sanger Instituteの研究グループの2018年Genome Research 論文 [*]に関連する実験プロトコル
細胞膜に埋め込まれた細胞表面受容体間の直接的な相互作用を介した細胞間コミュニケーションは、多細胞生物の正常な発達と機能発揮に不可欠である。しかし、これらの相互作用を検出することは技術的に困難なままである。本論文では、特定の細胞表面認識イベントに必要な細胞経路を明らかにする、ゲノムスケールのCRISPR/Cas9ノックアウト遺伝子スクリーニングアプローチについて説明する。
このアッセイは、哺乳類タンパク質発現系で生産された組み換えタンパク質をアビド結合プローブとして利用し、細胞ベースの遺伝子スクリーニングで相互作用相手を同定するものである。この方法によって、膜に埋め込まれた受容体の細胞外ドメインに対応する組換え結合プローブによって検出される細胞表面相互作用に必要な遺伝子を同定することができる。また、この方法はゲノムスケールであることから、直接的に受容体を同定するだけでなく、受容体が細胞表面に提示されるために必要な細胞内構成要素をも同定できる利点があり、受容体の生物学に対する貴重な知見を提供することができる。
細胞膜に埋め込まれた細胞表面受容体間の直接的な相互作用を介した細胞間コミュニケーションは、多細胞生物の正常な発達と機能発揮に不可欠である。しかし、これらの相互作用を検出することは技術的に困難なままである。本論文では、特定の細胞表面認識イベントに必要な細胞経路を明らかにする、ゲノムスケールのCRISPR/Cas9ノックアウト遺伝子スクリーニングアプローチについて説明する。
このアッセイは、哺乳類タンパク質発現系で生産された組み換えタンパク質をアビド結合プローブとして利用し、細胞ベースの遺伝子スクリーニングで相互作用相手を同定するものである。この方法によって、膜に埋め込まれた受容体の細胞外ドメインに対応する組換え結合プローブによって検出される細胞表面相互作用に必要な遺伝子を同定することができる。また、この方法はゲノムスケールであることから、直接的に受容体を同定するだけでなく、受容体が細胞表面に提示されるために必要な細胞内構成要素をも同定できる利点があり、受容体の生物学に対する貴重な知見を提供することができる。
[*]
- "Genome-scale Identification of Cellular Pathways Required for Cell Surface Recognition" Sharma S [..] Wright GJ.Genome Res 2018-06-18.
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