[出典] A scalable CRISPR/Cas9-based fluorescent reporter assay to study DNA double-strand break repair choice. Roidos P, Sungalee S [..] Mardin BR. Nat Commun 2020-08-14.
DNA損傷の中で最も細胞毒性が高い二本鎖DNA切断 (DSBs)に対する修復過程は、DNA末端の削り込み (end resection)またはDNA末端の保護 (end protection)の選択から始まる。BioMed X InstituteとEMBLにHeidelberg University HospitalとMerck KGaAが加わった研究グループは今回、このDSB修復過程の研究手段として、双方の過程を同時に定量化するレポーターシステム, Color Assay Tracing-Repair (CAT-R), を開発した。
CAT-Rは、CRISPR-Cas9によって直列に結合した2種類の蛍光タンパク質遺伝子に誘導したDSBの修復結果において、小規模な挿入/欠失 (indels)と大規模な欠失を判別可能とする [Fig. 1引用右図参照]。- 研究グループはCAR-Tを利用して、DNA損傷応答 (DDR)を標的とする前臨床または臨床試験が進行中の21種類の化合物のin vitro活性の評価、および、DNA損傷応答に関与するとされている417種類の因子が2種類の経路の選択に与える影響を分析した。
- 次いで、eGFPがBEPに変換されることをノックインの指標とするバージョンのCAT-Rを開発し、ヌクレオチド除去修復 (Nucleotide excision repair: NER)の阻害が、ssODNをドナーテンプレートとするsingle-stranded template repair (SSTR)によるエラーフリーな修復を亢進することを見出した [Fig. 5引用右図参照]。
コメント