[出典] PROTOCOL "Extensible combinatorial CRISPR screening in mammalian cells" Zhou O, Wan YK, Chan BKC, Choi GCG, Wong ASL. STAR Protocols. 2021-01-09.

[プロトコルが由来する原論文] "A Three-Way Combinatorial CRISPR Screen for Analyzing Interactions among Druggable Targets" Zhou P [..] Wong ASL. Cell Rep 2020-08-11. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2020.108020; crisp_bio 2020-08-15 "2剤および3剤併用療法を促進するCRISPR KOスクリーン法 "CombiGEM-CRISPR v.2.0" https://crisp-bio.blog.jp/archives/23895623.html

[グラフィカルアブストラクト参照] https://ars.els-cdn.com/content/image/1-s2.0-S2666166720302422-fx1.jpg
  1. [ステップ1] Cas9, 多重なプロモーター (hH1/hU6/mU6), 多重なgRNAsと多重なスキャフォールド (野生型/v1/v2 バーコード付きsgRNAスキャフォールド)の用意
  2. [ステップ2] プロモーターとsgRNAsのペアのライゲーション (~3-5週間)
  3. [ステップ3] レンチウイルスの生成、標的細胞へのデリバリーおよびバーコードシーケンシングを介したスクリーニング (~2-4週間)
  4. [ステップ4] データ解析パイプラインCombiPIPE (~ 1週間)