[注] POCT: Point of Care Testing/臨床現場即時検査
[出典] "Dual Methylation-Sensitive Restriction Endonucleases Coupling with an RPA-Assisted CRISPR/Cas13a System (DESCS) for Highly Sensitive Analysis of DNA Methylation and Its Application for Point-of-Care Detection" Wang X [..] Huo D, Hou C. ACS Sens. 2021-05-21. https://doi.org/10.1021/acssensors.1c00674
[出典] "Dual Methylation-Sensitive Restriction Endonucleases Coupling with an RPA-Assisted CRISPR/Cas13a System (DESCS) for Highly Sensitive Analysis of DNA Methylation and Its Application for Point-of-Care Detection" Wang X [..] Huo D, Hou C. ACS Sens. 2021-05-21. https://doi.org/10.1021/acssensors.1c00674
DNAメチル化の高感度検出法は，癌の診断と治療に有用である．重慶大学生物工程学院の研究グループは以下の行程で進行するDESCS (Dual methylation-sensitive restriction endonucleases coupling with a recombinase polymerase amplification (RPA)-assisted CRISPR/Cas13a system) を開発した．
- 2つのメチル化感受性制限エンドヌクレアーゼ (BstUIとHhaI)により，メチル化されている領域を選択的に消化する．
- メチル化されたDNAがRPA反応を誘起する．
- T7プロモーターを帯びたRPA産物が，T7 RNAポリメラーゼの存在下で転写され、大量の一本鎖RNA (ssRNAs)が生成される．
- ssRNAsを認識したCas13aがコラテラル活性を発揮する．
- Cas13aコラテラル活性で切断されたFQレポーター (ssDNA-fluorescently quenched reporter)が蛍光を発する．
DESCSにより，微量の (0.01%の)メチル化DNAを，大量の非メチル化DNAから識別可能であり，また，ラテラルフローバイオセンサー (LFB)を組み込み，ポイントオブケアテスト (PCOT)に展開を可能にした．
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