[出典] "Reprogrammed CRISPR-Cas13b suppresses SARS-CoV-2 replication and circumvents its mutational escape through mismatch tolerance" Fares M [..] Lewin SR, Trapani JA. Nat Common. 2021-07-13. https://doi.org/10.1038/s41467-021-24577-9
　Peter MacCallum Cancer Centre/U MelbourneとU Melbourne at the Peter  Doherty Institute for Infection and Immunityを主とする研究するグループからの論文
  • Prevotella sp. P5-125 (PspCas13b) -crRNAシステムを採用した．
  • PspCas13b_1レポーターシステムでのアッセイ: レポーター (CMV-スパイクタンパク質配列-P2A-蛍光タンパク質配列)を利用して，HEK392T細胞とVERO細胞において，スパイクタンパク質またはヌクレオカプシドを標的とするcrRNAsにより，サイレンシング可能なことを示した．効率は用量に依存するが >98%に到達した [右図は，スパイクタンパク質を標的とする4種類のcRNAsを利用した場合の結果Fig 1 https://www.nature.com/articles/s41467-021-24577-9/figures/1 の一部]．
  • レポーターアッセイに続いて，crRNAを最適化し多重化したPspCas13bシステムが，複製能をおびたSARS-CoV-2 (祖先型，D614G変異株，およびアルファ株)の複製を抑制することを，VERO細胞において確認した．
  • さらに，crRNAと標的のミスマッチの影響を１塩基分解能で分析し，PspCas13b-crRNAシステムが１塩基のミスマッチに寛容であり，祖先株と変異株の双方について複製を抑制することを発見した．PspCas13b_7
  • PspCas13b-crRNAの多重化とミスマッチ寛容性に拠って，SARS-CoV-2および他のウイルスの複製と免疫を回避する変異体の生成の抑制が可能とした [Figure 7 https://www.nature.com/articles/s41467-021-24577-9/figures/7 引用右図参照]
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