1.       CRISPR Cas9ノックアウト実験でリジン・メチル化酵素候補を検証

METTL21B is a novel human lysine methyltransferase of translation elongation factor 1A: discovery by CRISPR/Cas9 knock out. Mol Cell Proteomics. 2017 Jun 29. pii: mcp.M116.066308.Ca. Marc R. Wilkins (UNSW)

K562細胞を試料として、メチル基伸長候補酵素METTL21BとMETTL23ならびにコントロールとして既知酵素EEF1AKMT1をCRISPR/Cas9をノックアウト（KO）し、野生型とともにターゲットLC-MS/MSで解析；EEF1AKMT1 KOは想定通りLys79欠損を、一方で、METTL21B KOはLys79欠損をもたらした；加えて、組換えMETTL21Bは、in vitroでeEF1A1とeEF1A2のLys165をメチル化；プロテオーム解析からMETTL21B KOがリボソーム大サブユニットを選択的に上方制御することも見出し、脊椎動物のみに存在するMETTL21BをeEF1A-KMT3と命名することを提案。

2.       標的遺伝子座に安全にDNAを導入する技術を探る

Comparative analysis of chimeric ZFP-, TALE- and Cas9-piggyBac transposases for integration into a single locus in human cells. Nucleic Acids Res. Published online 2017 Jun 29.

ヒトX染色体上のHRRTを標的として、piggyBacトランスポゾンのアミノ末端にZFP-、TALE-、SpCas9-ならびにdPCas9-を結合した転移酵素キメラのノックアウト/ノックイン活性を比較

3.       CRISPR/Cas9でジアミド系殺虫剤耐性機構を探る

Investigation of the contribution of RyR target-site mutations in diamideresistance by CRISPR/Cas9 genome modification in Drosophila. Insect Biochem Mol Biol. 2017 Jun 29. pii: S0965-1748(17)30097-8.

Tuta absoluta（トマトキバガ）をサンプルとして、リアノジン受容体（RyRs）を標的とするジアミド系殺虫剤に対する耐性変異（G4946E/VとI4790M）頻度と３種の薬剤に対する耐性プロファイルを解析；CRISPR Cas9で変異導入したショウジョウバエの耐性プロファイル解析し検証

4.       タイプIII　CRISPR-Casシステム獲得免疫の分子機構

A cyclic oligonucleotide signaling pathway in type III CRISPR-Cas systems. Science. Published online 2017 Jun 29.

サーモフィラス菌（S. thermophilus）では、Csmエフェクター複合体（HDヌクレアーゼドメインと２つの機能不明のPalmドメインを持つCas10サブユニットを含む）とRNase活性を持つCsm6によって獲得免疫応答が成り立っている。今回、Csmエフェクターの標的RNA結合が、Palmドメインを介して、Cas10によるcyclic oligoadenylates cOAn_n(n = 2-6)合成の引き金を引き、cOAsがCsm6に結合してその非特異的RNA分解を亢進するシグナル伝達パスウエイの存在が明らかになった。

5.       嗅覚受容体を標的とするCRISPR/Cas9による害虫防除

CRISPR/Cas9 Editing of the Codling Moth (Lepidoptera: Tortricidae) CpomOR1 Gene Affects Egg Production and Viability. J Econ Entomol. Published online 2017 June 29.

ナシの害虫コドリンガ (Lepidoptera: Tortricidae) のCpomOR1にCRISPR/Cas9でindels導入しOR1蛋白質をノックダウン、産卵と生育力抑制

6.       CRISPR/Cas9によるNHEJを介して、ヤギ由来初代繊維芽細胞においてRig-I(retinoic acid-inducible gene-1) のノックアウトを実現

Generation of Genomic Deletions (of Rig-I GENE) in Goat Primary Cell Culture Using CRISPR/CAS9 Method. Anim Biotechnol. 2017 Jun 29:1-11.

7.       “自己開裂”GFP発現プラスミドを利用した予備実験で効果的gRNAsをスクリーニング

A convenient method to pre-screen candidate guide RNAs for CRISPR/Cas9 gene editing by NHEJ-mediated integration of a ‘self-cleaving’GFP-expression plasmid. DNA Res. Published online 2017 June 30.

8.       癌特異的hTERTプロモータを利用したCRISPR/Cas9システムで、膀胱癌細胞の増殖を選択的に阻害

An enhanced hTERT promoter-driven CRISPR/Cas9 system selectively inhibits the progression of bladder cancer cells. Mol BioSyst. Published online 2017 June 30

9.       デュアルsgRNAsを組込んだCRISPR/Casにより、ヒトパピローマウイルス18の遺伝子E6とE7の双方を同時に削除することで子宮頚癌細胞の増殖を阻害

Deletion of HPV18 E6 and E7 genes using dual sgRNA-directed CRISPR/Cas9 inhibits growth of cervical cancer cells. Int J Clin Exp Med. 2017;10(6):9206-9213

HeLa細胞においてE6とE7の同時削除により、p53とRb蛋白のレベルが回復し、細胞死が誘導され、細胞増殖が抑制された.

10.   物理地図と遺伝子発現解析から同定したトマトのジョイントレス（j-2）表現型に関与する候補遺伝子を、CRISPR/Cas9ノックアウト実験により検証

Natural and induced loss of function mutations in SlMBP21 MADS-box gene led to jointless-2 phenotype in tomato. Sci Rep. 2017 Jun 30;7(1):4402. 

【注】Twitterでは2017/07/05にツイート