[出典] "Gene editing in Plasmodium berghei made easy: Development of a CRISPR/Cas9 protocol using linear donor template and ribozymes for sgRNA generation" Deligianni E, Kiamos IS. Mol Biochem Parasitol 2021-09-16. https://doi.org/10.1016/j.molbiopara.2021.111415
相同組み換え修復用テンプレートとして600~700 bpの相同アームを備えた線形のドナーテンプレートを利用し,リボザイム-ガイド-リボザイム (Ribozime-Guide-Ribozyme, RGR) [*]システムを利用して単一のプラスミドからsgRNAとCas9を生成することで,標題の簡便化を実現した.
この手法により,FLAGをコードする配列をACT2 遺伝子座に挿入し,この改変が,蚊を介した感染を含むネズミマラリア原虫のライフサイクルの完了に影響しないことを確認した.
[*] RGR参考資料
[*] RGR参考資料
- Efficient in vivo and in vitro guide RNA synthesis using ribozyme-flanked construct for CRISPR systems. http://labs.biology.ucsd.edu/zhao/CRISPR_web/RGR_design_home_frame_set.html
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