[出典] "An Episomal CRISPR/Cas12a System for Mediating Efficient Gene Editing" Duan N, Tang S [..] Zhou M, Liang D. Life. 2021-11-18. https://doi.org/10.3390/life11111262
　CRISPR/Casシステムによる遺伝子編集は，再生医療への利用が期待されているiPSCなどの幹細胞では特に編集効率が低いことが知られている．中南大学 (長沙市)の研究グループは今回，CRISPR/Cas12aとOrip/EBNA1が組み込まれたエピソーマルベクターにてデリバリーする遺伝子変種システム (COE)を設計・検証した．
  • HEK-293T細胞を対象として，フローサイトメトリーとRFLPにより編集効率を評価し，続いて，COEをiPSCにヌクレオフェクションし，PCRとサンガーシーケンシングによって編集効率を評価した．
  • HEK-293T細胞では，時間を延長することで，最大90%の挿入・欠失率を達成した．
  • iPSCにおいて，ジストロフィン遺伝子 (DMD)のエクソン51を含む2.5kbの断片の欠失を試み，解析した14クローンのうち3クローンに欠失が見られた．
  • さらに，心筋細胞由来のエクソン51を削除したiPSCは，デュシェンヌ型筋ジストロフィー (DMD)患者由来のiPSCと同様の発現プロファイルを示した．
  • COE編集細胞は，プラスミドの各成分フリーであった．
　COEは安全で強力な遺伝子編集の新たなツールである．