[出典] "Study of the CRISPR/Cas3 System for Xenotransplantation" Miyagawa S et al. Transplant Proc 2022-01-11. https://doi.org/10.1016/j.transproceed.2021.09.070
　ブタからのヒトへの異種臓器移植を目的として，異種抗原GGTA1のCRISPR/Cas9によるノックアウトなどが試みられてきたが [1~3]，大阪大学，明治大学および東京大学の研究グループは今回，初めて、CRISPR-Cas3 [4]によるGGTA1遺伝子編集を試みた．
  • Cas3Type I-E型CRISPRシステムは，crRNA, Cas3，およびCascade (Cas5 + Cas6 + 7つのCas7 + Cas8 + 2つのCas11)で構成されている [Cas3関連先行論文 [＊] (Nat Commun, 2019) から引用した右図参照]．
  • bpNLS-Cascade，BPNLS-hCas3，およびpBS-U6icrRNAのプラスミドを準備した．
  • GGTA1のエクソン9を標的とする２種類のcrRNAs (以下，#45と#86)を設計した．
  • ブタ線維芽細胞に，hCas3＋＃45＋＃86 (グループ1、コントロール)，Cascade＋hCas3＋＃45 (グループ2)，Cascade＋hCas3＋＃86 (グループ3)，およびCascade＋hCas3＋＃45＋＃86  (グループ4)を投与しFACSで比較し，その結果，α1-3Galエピトープのバルク発現量の変化が，G4 > G2 > G3の順になり，Cas3の効果が証明された．
  • PCR解析からは，GGTA1における294〜754 bpの欠失が確認された．
[関連crisp_bio記事]
  1. 2021-03-30 [レビュー] ブタからヒトへの臓器異種移植研究におけるCRISPR/Cas技術．https://crisp-bio.blog.jp/archives/25954517.html
  2. 2020-08-23 ブタからの臓器移植の障害となる異種抗原GGTA1をCRISPR/Cas9によりノックアウト．https://crisp-bio.blog.jp/archives/23967796.html
  3. CRISPRメモ_2017/08/23 FokI-dCas9を利用したブタGGTA1遺伝子座への抗CD2モノクローナル抗体遺伝子導入．https://crisp-bio.blog.jp/archives/3428664.html
  4.  [＊] 2019-12-07 CRISPR-Cas3を介したエクソン・スキッピングによるDMD遺伝子変異修復. https://crisp-bio.blog.jp/archives/21075878.html