[出典] "Examining the Interaction Between Cas9 and Ku, and its Implications for Gene Editing" Hayes CM, Bharti A, Hanakahi LA. FASEB J. 2022-05-13. https://doi.org/10.1096/fasebj.2022.36.S1.R2092 [著者所属] University of Illinois Chicago;
なぜCas9によって誘導されたDNA二本鎖切断 (DSB)からの修復過程として,相同組み換え修復 (HDR)よりもNHEJが顕著なのか?著者らは今回,Cas9とNHEJの開始に関与する因子Kuとが直接的な物理的相互作用を持っていると仮定し,精製した組換えタンパク質を用いて,アフィニティーキャプチャーアッセイを行った.
その結果,Cas9がKuを捕捉すること,この相互作用が他のヒト細胞内タンパク質には依存しないこと,を同定した.また,この相互作用は,臭化エチジウムやベンゾナーゼを添加してKuのDNA結合を阻害した場合にも発生した.これらの結果は,KuとCas9が,DNAを介さずに直接タンパク質間相互作用を持つことが示し [Graphical abstract参照],Cas9-Ku相互作用がCas9誘導型DSBに応答してNHEJ因子を動員する可能性を示唆した.
その結果,Cas9がKuを捕捉すること,この相互作用が他のヒト細胞内タンパク質には依存しないこと,を同定した.また,この相互作用は,臭化エチジウムやベンゾナーゼを添加してKuのDNA結合を阻害した場合にも発生した.これらの結果は,KuとCas9が,DNAを介さずに直接タンパク質間相互作用を持つことが示し [Graphical abstract参照],Cas9-Ku相互作用がCas9誘導型DSBに応答してNHEJ因子を動員する可能性を示唆した.
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