[出典] "Bio-Orthogonal Chemistry Conjugation Strategy Facilitates Investigation of N-methyladenosine and Thiouridine Guide RNA Modifications on CRISPR Activity" Hoy A, Zheng YY, Sheng J, Royzen M. CRISPR J. 2022-11-15. https://doi.org/10.1089/crispr.2022.0065 [著者所属] University at Albany
著者らは今回、生体直交化学を利用して、核酸塩基修飾を施した機能性sgRNAを効率的に組み立てるコンジュゲーション戦略を開発した。この方法では、テトラジン（Tz）基を含む31merとトランス-シクロオクテン（TCO）部位で修飾した70merの2つの短いRNAオリゴヌクレオチドを化学合成し、この2つのオリゴヌクレオチドをコンジュゲートして、機能的なsgRNAを形成させる。
この2成分結合法を用いて、N1-メチルアデノシン（m1A）、N6-メチルアデノシン（m6A）、2-チオウリジン（s2U）、4-チオウリジン（s4U）などの核酸塩基修飾を有するsgRNAライブラリーを合成し、これらのRNA修飾がCRISPR活性全体に及ぼす影響を およびCas9発現HEK293T細胞で分析した。
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