[出典] "Doxycycline-dependent Cas9-expressing pig resources for conditional in vivo gene nullification and activation" Jin Q, Liu X, Zhuang Z, Huang J [..] Wang K, Lai L. Genome Biol 2013-01-17. https://doi.org/10.1186/s13059-023-02851-x [著者所属] Guangzhou Institutes of Biomedicine and Health, Research Unit of Generation of Large Animal Disease Models, Sanya Institute of Swine Resource, Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Wuyi U, Guangzhou Medical U
 SpCas9はゲノム編集ツールとして最も広く利用されているヌクレアーゼであるが、大型動物への展開には、デリバリーと生体内発現調節が、未だ課題である。
 中国の研究チームは今回、これらの障害を回避するため、テトラサイクリン誘導性発現エレメントをRosa26 遺伝子座とHipp11 遺伝子座にそれぞれ正確にノックインすることにより、ドキシサイクリン誘導性SpCas9発現ブタ(DIC)モデルを作製した。
 DICブタモデルを用いることで、in vitroでも生体内でもゲノム・エピゲノム編集が容易になった。DIC システムをベースに、rtTA 成分の発現を組織特異的プロモーターで制御することにより、Cas9 ベースのコンディショナルノックアウト戦略を考案し、簡単な化学誘導で生体内の遺伝子機能の時空間制御を可能にする生殖細胞遺伝性ブタのワンステップ作製に成功した。
 DICブタを用いたin vivo 遺伝子変異の実現性を検証するために、TP53 -sgRNA、LKB1 -sgRNA、変異ヒトKRAS 遺伝子(KRAS <G12D>)を含む単一のAAV6ベクターを成人の膵臓に投与して、原発性および転移性の膵管腺癌を発症させた。