[出典] "Targeted dual base editing with Campylobacter jejuni Cas9 by single AAV-mediated delivery" Kweon J [..] Kim Y. Exp Mol Med 2023-02-01. https://doi.org/10.1038/s12276-023-00938-w [著者所属] U Ulsan College of Medicine, Kyung Hee U, Toolgen Inc.
ゲノム工学では、様々なCRISPR-Cas9のオーソログそしてまたはその改変体が使用されている。その中でCampylobacter jejuni 由来Cas9（cjCas9）は、最小のCas9 オルソログの一つであり、高い特異性を持つゲノム編集を可能とする。
韓国の研究チームは今回、
シトシン塩基エディタ（cjCBEmax）とアデニン塩基エディタ（cjABE8e）を含むcjCas9をベースとする塩基エディター (base editors: BEs）を開発し [Fig. 1引用右図参照]、HEK293T細胞においてHPD 遺伝子に最大91.2%の内在性塩基置換を誘導することに成功した。
シトシン塩基エディタ（cjCBEmax）とアデニン塩基エディタ（cjABE8e）を含むcjCas9をベースとする塩基エディター (base editors: BEs）を開発し [Fig. 1引用右図参照]、HEK293T細胞においてHPD 遺伝子に最大91.2%の内在性塩基置換を誘導することに成功した。 13カ所の塩基編集を解析した結果、cjCBEmaxとcjABE8eが活性を示すウインドウ幅がSpCas9ベースのBEよりも広く、その特異性はcjCas9よりもわずかに低いことが示された。
また、cjCas9とgRNAの足場を再設計することで 
[Fig. 3 引用左図参照参照 ]、HEK293T細胞の HIF1A 遺伝子においてcjABE8eの塩基編集効率を最大6.4倍まで向上させることができた。
[Fig. 3 引用左図参照参照 ]、HEK293T細胞の HIF1A 遺伝子においてcjABE8eの塩基編集効率を最大6.4倍まで向上させることができた。 さらに、cjABE8eのサイズが小さいことから、2つのgRNAをタンデムに配列したコンストラクトを単一のアデノ随伴ウイルスベクターにパッケージすることができ、内在性のANGPT2 およびHPD の標的部位に塩基置換を導入することが可能になった。
今回の成果により、in vivoあるいはex vivoでの治療法として、塩基エディターの活用の可能性が広がった。
[関連crisp_bio記事]
- 2022-10-12 [解説] SpCas9よりも小型でAAVへのパッケージングが可能なCjCas9による遺伝子治療の試み. https://crisp-bio.blog.jp/archives/30446245.html；Commentary "Expanding CRISPR repertoire using CjCas9 as a smaller editing tool" Francis C, Amiji M. Mol Ther Nucleic Acids 2022-09-30. https://doi.org/10.1016/j.omtn.2022.09.013
- 2022-03-12 コンパクトなCjCas9の高活性かつ広域標的版変異体 'enCjCas9"を合理的に設計. https://crisp-bio.blog.jp/archives/28851483.html；"Engineered Campylobacter jejuni Cas9 variant with enhanced activity and broader targeting range" Nakagawa R [..] Nishimasu H, Nureki O. Commun Biol 2022-03-08. https://doi.org/10.1038/s42003-022-03149-7
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