[出典] "Application of CRISPR-Based C-to-G Base editing in rice protoplasts" Lee J [..] Jung C. Appl Biol Chem 2-23-03-07. https://doi.org/10.1186/s13765-023-00775-5 [著者所属] Seoul National U.
韓国の研究チームが、これまでに報告されている植物塩基エディター（plant base editor: PBE）[＊1]と、ヒトにおけるC-to-G塩基編集を実現したCGBE [＊2] をベースとして、単子葉植物に提要可能な（monocot plant-compatible CGBE）である"PcCGBE"の開発を試みた。
PBEは、トウモロコシのユビキチン1（Ubi-1）プロモーターの制御下で、イネのコドンに最適化されたrAPOBECとnCas9（D10A）のN末端融合とC末端のUGI（ウラシル糖鎖阻害剤）で構成されている。 ヒトの "miniCGBE"[＊2]の構造に基づいて、PBEからUGIセグメントを除去し、他のセグメントを残して "miniPcCGBE "を構築した。これは、UGIがないため塩基除去修復 (BER) 経路が優先され、miniPcCGBEはC-to-Gの塩基編集活性を示すと想定したからである。
次に、ウラシル糖鎖の活性化によりBER経路が促進され、ヒト細胞で観察されるような優先的なC-to-G塩基編集活性につながることを期待して、miniPcCGBEのN末端にイネ・コドン最適化UNG（ウラシルN-グリコシラーゼ）を付加して"PcCGBE"を構築した [Fig. 1引用右図参照] 。
イネ内在性遺伝子OsAAT、OsALS2、OsCKX2、OsSPL14を標的とした4つのgRNAを設計し、OsU3プロモーターがイネ・プロトプラストでの各gRNAの発現を駆動できるよう、別々のプラスミドを調製した。
[＊] 引用crisp_bio記事と論文
- "Precise base editing in rice, wheat and maize with a Cas9-cytidine deaminase fusion" Zong Y, Wang Y, Li C, Zhang R, Chen K, Ran Y, Qiu JL, Wang D, Gao C. Nat Biotechnol 2017-02-27. https://doi.org/10.1038/nbt.3811
- 2020-07-22 Joungグループ, BE4max (C-to-T)をCGBE1(C-to-G)へと変身させた. https://crisp-bio.blog.jp/archives/23678774.html
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