[注] MEF (Mouse Embryonic Fibroblast / マウス胎児線維芽細胞)
[出典] "Generation of CRISPR-Cas9-mediated knockin mutant models in mice and MEFs for studies of polymorphism in clock genes" Lee K, Lee C. Sci Rep. 2023-05-19. https://doi.org/10.1038/s41598-023-35203-7 [著者所属] Florida State U.
米国の研究チームが、同じsgRNAsと相同組み換え修復 (HDR) 用テンプレートのセットを利用して、MEFとマウスに、2種類の時計遺伝子, Per1 とPer2 , に２つの点変異を生成し、デジタルPCRによる変異頻度の定量的比較を行った。
- マウス接合体における変異頻度がMEFにおける変異頻度よりも1桁高い。
- 一方で、MEFに見られた変異頻度は、数十個の細胞のスクリーニングによってクローンを単離するには十分な頻度であった。
- Per 変異を帯びた細胞から、概日時計の主要な分子機構であるPERリン酸化の制御においてPASドメインが担っている機能について新たな知見を得た。
- バルクのMEF集団の変異頻度の定量から、CRISPRプロトコルの最適化と、今後の研究に向けて細胞モデル作製に向けたタイムラインと資源ロジスティックの計画 [Figure 5 参照]に有用な手がかりを得ることができた。
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