[出典] "Multiplexed Guide RNA Expression Leads to Increased Mutation Frequency in Targeted Window Using a CRISPR-Guided Error-Prone DNA Polymerase in Saccharomyces cerevisiae " Gossing M [..] David F. ACS Synth Biol 2023-07-24. https://doi.org/10.1021/acssynbio.2c00689 [著者所属]  AstraZeneca, Chalmers U Technology, Novo Nordisk Foundation Center for Biosustainability (TUD), Alderley Lighthouse Laboratories Ltd.

　先行研究で開発された酵母版指向性進化法EvolvR [＊：以下、yEvolvR]を利用して、多重化gRNAsを利用した場合の、突然変異誘発頻度と復帰突然変異の頻度をモニターした。フェノタイプに基づくアッセイでは、多重gRNAsの同時発現が、より高い復帰突然変異の頻度をもたらした。NGS解析では、gRNAsの多重化が、突然変異誘発頻度に相乗効果を与え、この現象は、DNAミスマッチ修復システムの一部で不全の場合に特に顕著になることが、示された。加えて、突然変異誘発の時間的制御を可能とするガラクトース性yEvolvRを評価した。