[出典] "MTOR as a selectable genomic harbor for CRISPR-engineered CAR-T cell therapy" Levesque S [..] Doyon Y. bioRxiv 2023-09-06 (preprint). https://doi.org/10.1101/2023.09.14.557485 [著者所属] U Laval, U Laval Cancer Research Centre, Trev and Joyce Deeley Research Centre (BC Cancer), U Victoria, Medical Affairs and Innovation (Héma-Québec)
ラパマイシンは、腫瘍の免疫逃避を逆転させる抗腫瘍性を発揮することから、他の抗がん剤との併用療法が試みられている。しかし、CAR-T細胞療法と併用するには、エフェクターT細胞をラパマイシンから保護する必要がある。Huyeらは [＊1]、初代T細胞にCD19-CARと同時にラパマイシン耐性mTOR導入遺伝子を組み込んだCAR-T細胞が、ラパマイシン存在下で選択的に増殖が亢進し、その結果、CAR-T細胞療法とラパマイシンの併用療法において抗腫瘍活性が増強されることを報告した。
カナダの研究チームは今回、同様のアプローチであるが、T細胞の改変に、Huyeらが利用したランダムな組み込みをもたらすpiggyBacトランスポゾンではなく、プログラム可能な遺伝子操作を可能にするCRISPR技術をベースとするT細胞改変を試みた。
- CRISPR-Cas9を用いて内因性のMTOR遺伝子座を編集することで、ラパマイシンに対する細胞耐性を持たせるアプローチを試みた [ rapamycin-resistant (RapaR) CAR-Tを作出]。
研究チームは始めに、MTOR 遺伝子座で飽和プライム編集 [＊2]を行い、ラパマイシン耐性をもたらす最適な変異を同定し、その特徴を明らかにした。- 次に、CRISPR-Cas9を利用して、CAR発現カセットをMTOR 遺伝子座にターゲティングすることで、ラパマイシン耐性（rapamycin-resstant ) CAR-T細胞 (RapaR CAR-T細胞) を作製した。[Figure 3 引用右図参照]
- In vitro 細胞毒性アッセイとヒト化急性リンパ芽球性白血病マウスモデルを用いて、RapaR-CAR-T細胞がラパマイシン存在下でCD19+白血病細胞を効率的に標的化できることを示した
さらに、MTORおよびTRAC遺伝子座へのラパマイシン制御免疫受容体複合体（DARIC）の多重ターゲッティングを介して、CAR-T細胞の活性を薬理学的に制御することを可能にした [Figure 5引用右図参照]。
本研究のアプローチは、CRISPR改変CAR-T細胞のin vivo およびex vivo での濃縮を容易にすると同時に、腫瘍の根絶を向上させる可能性がある。
[＊]
- "Combining mTor inhibitors with rapamycin-resistant T cells: A two- pronged approach to tumor elimination" Huge LE [..] Rooney CM. Mol Ther 2011-08-30. https://doi.org/10.1038/mt.2011.179
- [20220313更新] プライム・エディティング (PE)をベースとする飽和ゲノム編集によるVUSの機能同定. https://crisp-bio.blog.jp/archives/26405376.html；"Saturation variant interpretation using CRISPR prime editing" Erwood S, Bily TMI, Lequyer J [..] Ivakine EA, Cohn R. Nat Biotechnol. 2022-02-21. https://doi.org/10.1038/s41587-021-01201-1
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