[出典] PROTOCOL "Generation of mouse models carrying B cell restricted single or multiplexed loss-of-function mutations through CRISPR-Cas9 gene editing" Ten Hacken E, Gruber M, Hernández-Sánchez M, Hoffmann GB, Baranowski K, Redd RA, Clement K, Livak K, Wu CJ. STAR Protocol. 2023-09-18. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2023.102165 [著者所属] Dana Farber Cancer Institute, Harvard Medical School, CEMM Research Center for Molecular Medicine of the Austrian Academy of Sciences, U Complutense de Madrid, Broad Institute of MIT and Harvard, Massachusetts General Hospital, Brigham and Women’s Hospital; グラフィカルアブストラクト
B細胞限定Cas9発現を帯びているマウス系統の幹細胞工学を用いて、リンパ増殖性疾患に典型的な機能喪失型遺伝子ドライバーのB細胞限定モデルマウスを作製するプロトコールを紹介する。
sgRNA-mCherryを発現するレンチウイルスの調製、造血幹細胞および前駆細胞の単離、in vitroでの形質導入の手順について述べる。次に、レシピエント・マウスへの操作細胞の移植と遺伝子編集の検証について詳述する。
これらのマウスモデルは、リンパ増殖性疾患に典型的な複雑な疾患形質をモデル化する汎用性の高いプラットフォームである。
[注] このプロトコールの使用と実行に関する完全な詳細については、ten Hackenを筆頭著者とする3論文を参照のこと：
- "High throughput single-cell detection of multiplex CRISPR-edited gene modifications" Genome Biol. 2020-10-20. https://doi.org/10.1186/s13059-020-02174-1；CRISPR-Cas9による癌関連遺伝子の多重編集が実現した単一細胞をハイスループットで検出する法
- "Loss-of-function lesions impact B-cell development and fitness but are insufficient to drive CLL in mouse models" Blood Adv 2023-08-11.https://doi.org/10.1182/bloodadvances.2022009135
- "In vivo modeling of CLL transformation to Richter's syndrome reveals convergent evolutionary paths and therapeutic vulnerabilities" Hacken E [..] Wu CJ. Blood Cancer Discov. 2023-03-01. https://doi.org/10.1158/2643-3230.BCD-22-0082
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