１．CRISPR/Cas獲得免疫機構
[出典][解説] Semenova E, Severinov K. “Interdependencies Between the Adaptation and Interference Modules Guide Efficient CRISPR-Cas Immunity.” Evolutionary Biology: Self/Nonself Evolution, Species and Complex Traits Evolution, Methods and Concepts. pp 51-62. First Online 10 August 2017.
- CRISPR-Casを構成するadaptation（スペーサー獲得）とinterference（外来標的認識と破壊）のモジュールは、原核生物の獲得免疫応答の機能の観点から互いに独立しているが、両者の基質認識と活性の観点からは協働している；CRISPRリピートは、CRISPRアレイへのスペーサー挿入とともにcrRNA生合成の構造基盤であるadaptationもinterferenceもPAM認識から始まる；adaptationで選択されcrRNAへ転写されるスペーサはinterferenceモジュールに適合する；
２．バクテリアとアーケアのCRISPR-Casシステムとバクテリアファージの戦い
[出典][解説] Bonomo ME, Deem MW. “How the Other Half Lives: CRISPR-Cas’s Influence on Bacteriophages.” Evolutionary Biology: Self/Nonself Evolution, Species and Complex Traits Evolution, Methods and Concepts pp 63-85. First Online 10 August 2017.
- CRISPRによるファージの認識・破壊機構；免疫応答の獲得と欠失；CRISPRアレイ中のスペーサーの数とファージの多様性；ファージにおける変異と組換え（共進化；非同義変異の制約；バクテリアにおけるCRISPR以外の免疫機構；不均一な環境）；CRISPR免疫応答を回避するファージ進化の実験的裏付け（同義置換；組換え；PAM、seed配列及び非seed配列における変異；アーケア/バクテリア/ファージ群集の長期的メタゲノム解析；プラスミドによるCRISPR-Cas侵襲）；ファージのゲーム理論戦略（抗-CRISPRタンパク質；ファージに内在するCRISPR）；応用（バイオテクノロジー；マイクロバイオーム）
３．TP52遺伝子量の生物学的意味を解析するためのモデル作出
[出典] Raposo TP, Ebili HO,Ilyas M. “A refined method to study gene dosage changes in vitro using CRISPR/Cas9.” J Clin Pathol. 2017 Aug 9.
- HCT116細胞のTP53を標的とする実験：Cas9 mRNAと、TP53の異なるエクソンを標的としFAM-6で蛍光標識したsgRNAsを、HCT116細胞へ送達し、FACSによる変異細胞選択と高解像度融解曲線分析（HRM）による変異検出を実施。評価した32クローンの中で12クローンにて37.5%の編集効率を得、野生型と短縮されたタンパク質の共存や第３エクソンにおける一塩基欠失を見出した。
４．セロトニン（5-HT）不足による行動異常モデル構築を目指して、トリプトファンヒドロキシラーゼ2遺伝子ノックアウト・ブタを作出
[出典] Li Z et al. “Generation of tryptophan hydroxylase 2 gene knockout pigs by CRISPR/Cas9-mediated gene targeting.” J Biomed Res. 18 May 2017.
- CRISPR/Cas9によりBamaミニブタの胎児繊維芽細胞においてTph2遺伝子を効率61.5%で編集（両アレル変異発生は38.5%）。両アレル変異コロニーから体細胞核移植を介し、特定のコロニー由来についてTph2ノックアウト子豚を10匹得、5-HTレベルの激減を確認できた。Tph2ノックアウト子豚は野生型に比べて低体重であり離乳前までの生存率は36.4%に止まった。
５．[注]本論文については論文タイトルのみ入手
[出典] Wei L, WangX, Yang S. “Efficient generation of the mouse model with a defined point mutation through haploid cell-mediated gene-editing.” J Genet Genomics. Available online 12 August 2017.
コメント