[出典] "Continual improvement of CRISPR-induced multiplex mutagenesis in Arabidopsis" Develtere W [..] Jacobs TB. Plant J, 2024-05-07. https://doi.org/10.1111/tpj.16785
 [所属] Ghent U, VIB Center for Plant Systems Biology, GNOMIXX http://www.gnomixx.com

 CRISPR/Cas9は現在、植物ゲノムに突然変異を発生させるための最も強力なツールであるが、実験規模の拡大に伴い、より効率的なツールが必要とされている。モデル植物のシロイヌナズナでは、Cas9発現を駆動するプロモーターの選択が、生殖細胞系列変異の生成に重要である。いくつかの最適なプロモーターが報告されている。しかし、どのプロモーターが理想的であるかは、十分に比較試験されていないため不明である。さらに、ほとんどの植物ベクターは、最初に報告された2つのCas9核局在配列 (NLS) 構成のうちの1つを未だ使用している。

 ベルギーの研究チームが今回、単一および多重遺伝性変異の誘発を亢進することを目的として、シロイヌナズナT2植物6,000株以上の遺伝子型を解析し、14のターゲットにわたって7つのプロモーターと6種類のNLSをテストし、RPS5Aプロモーターとbipartite NLSが個々に最も効率的な構成要素であることを同定した。これらを組み合わせることで、T2植物の99%が少なくとも1つのノックアウト (KO) 変異を含み、84%が4~7重のKOを含んでいた。

 これらの最適化は、シロイヌナズナの生殖細胞系列でより高次のKOを作製するのに有用であり、他のCRISPRシステムにも応用できる可能性が高い。