[出典]  “CRISPR-Cas9 editing of synaptic genes in human embryonic stem cell for functional analysis in induced human neurons” Houcek A [..] Kavalali ET. STAR Protocols. 2024-05-24 https://doi.org/10.1016/j.xpro.2024.103089 [所属] Vanderbilt U; グラフィカルアブストラクト

　標的遺伝子変異を持つ安定したヒトES細胞 (hESC) を作製することで、比較的高い同質遺伝子性を維持しながら、多くの細胞内におけるタンパク質の機能を調べることができる。本プロトコル論文は、CRISPR-Cas9を用いて、シナプス伝達に関与する遺伝子に変異を持つノックアウトhESC株を作製する実験手法が解説している：gRNAの設計、クローニング、hESCトランスフェクション、およびクローン単離。また、遺伝子ノックアウトの検証とhESCを機能的な誘導神経細胞 (induced neurons: iN)へと分化させる手順について詳述する。

[本プロトコルが由来する原著論文]
誘導ヒト神経細胞において, シナプスの成熟と加齢に伴い神経伝達物質の放出が徐々に非同期化することを発見 “Neurotransmitter release progressively desynchronizes in induced human neurons during synapse maturation and aging” Uzay B [..] Kavalali ET. Cell Rep. 2023-02-28.https://doi.org/10.1016/j.celrep.2023.11204 [所属] Vanderbilt U.