１．Cas9発現マウスにAAV9でsgRNAsを送達し、出生後CRISPR/Cas9ゲノム編集を試みた

• “Postnatal Cardiac Gene-Editing Using CRISPR/Cas9 with AAV9-Mediated Delivery of Short Guide RNAs Results in Mosaic Gene Disruption.” Johansen AK et al. Circ Res. August 29, 2017.
• 心筋細胞特異的にCas9を発現させたマウスに、心筋細胞必須遺伝子３種類（Myh6、Sav1、Tbx20）それぞれを標的とするsgRNAsを心臓作用性のAAV9で送達したところ、編集効率が標的遺伝子によって異なり、Myh6を標的とするsgRNAのみが表現型に影響を与えることを見出した（（Cas9発現は心臓の機能と遺伝子発現には影響を与えなかった））。また、sgRNAペアを利用することでSav1遺伝子のコーディング領域削除を実現したが、心筋遺伝子のCRISPR/Cas9機能解析にはさらなる評価研究が必要。

２．CRISPR/Cas9で朝顔の色を編集

• “CRISPR/Cas9-mediated mutagenesis of the dihydroflavonol-4-reductase-B (DFR-B) locus in the Japanese morning glory Ipomoea (Pharbitis) nil.” Watanabe K, Kobayashi A, Endo M, Sage-Ono K, Toki S, Ono M. Sci Rep. 2017 Aug 30;7(1):10028.
• 我が国のナショナルバイオリソースプロジェクトで維持・研究されているアサガオ品種ムラサキの未熟胚培養細胞に、茎と花の色に関わるアントシアニン生合成酵素遺伝子dihydroflavonol-4-reductase-B (DFR-B)を標的とするCas9とsgRNA発現コンストラクトをアグロバクテリウム法で形質転換し、CRISPR/Cas9によるアサガオのゲノム編集が可能なことを実証した。
• 挿入図は三層の細胞分裂組織（L1〜L3）のうちL1とL2に起こった変異に依存する野生型（b）からの花と茎の色の変化を示す：

３．CRISPRiで非相同末端結合（NHEJ）修復を抑制し油性(oleaginous)酵母Y.lipolyticaの相同組換え（HR）修復によるゲノム編集を亢進

• “CRISPRi repression of nonhomologous end-joining for enhanced genome engineering via homologous recombination in Yarrowia lipolytica.” Schwartz C, Frogue K, Ramesh A, Misa J, Wheeldon I. Biotechnol Bioeng. 2017 Aug 19.
• dCas9と転写抑制因子Mxi1を融合し、TSSと、TATAボックスまたは近接するPAMを標的とするsgRNAsを利用することで、標的とした遺伝子９種類の中で８種類について転写抑制を確認。CRISPRiによりKU70とKU80の活性を一時的に抑制することにより、HRの効率を改善することに成功。

４．CRISPR/CRISPRi併用代謝工学

• “Combining CRISPR and CRISPRi Systems for Metabolic Engineering of E. coli and 1,4-BDO Biosynthesis.” Wu MY, Sung LY, Li H, Huang CH, Hu YC. ACS Synth Biol. Publication Date (Web): August 30, 2017.
• CRISPRで生合成経路を組込みCRISPRiで競合代謝経路を抑制することで、大腸菌による効率的1,4-ブタンジオール（1,4-BOD）生合成を実現。CRISPRにより６種類の遺伝子をノックインするなどにより、48時間で0.9/Lの力価を実現。さらに、CRISPRiにより、生合成経路からの1,4-BOD代謝フラックスを減じる遺伝子を抑制することで、1.8g/Lの力価（倍増）を実現し、γ-ブチロラクトン/コハク酸塩の力価をそれぞれ55%/83%減。