[出典] "High-accuracy crRNA array assembly strategy for multiplex CRISPR" Zhao X, Yang L [..] Zhang Y. Mol Ther Nucleic Acids. 2024-12-13. https://doi.org/ 10.1016/j.omtn.2024.102428 [所属] Children's Hospital Affiliated to Zhengzhou U, Zhengzhou U, Hangzhou Medical College, Xuzhou Medical U
近年、多様なCRISPR-CasヌクレアーゼとCRISPRアレイの利用により、複数の遺伝子座を同時に標的とするマルチプレックスCRISPR（multiplex CRISPR, 以下 mCRISPRと表記）が、多くのin vitroおよびin vivo研究で実施されている。その一方で、mCRISPRに必要な正確なCRISPRアレイの合理的で実用的なアセンブリー法はまだ確立されていない。中国の研究チームが今回、CRISPRアレイ・アセンブリのための、新規で、高精度で、コストと時間を節約できる戦略を実装した。
この戦略によって、1回の反応で12個のCRISPR RNA（crRNA）（AsCas12a用）と15個のcrRNA（RfxCas13d用）の効率的なアセンブルが実現した。さらに、Pol IIプロモーターによって駆動されるCRISPRアレイは、Pol IIIプロモーターによって駆動されるものと比較して、明瞭な発現パターンを示し、これをCRISPR編集の強度の制御に利用することが考えられた。次いで、長いCRISPRアレイを発現させるための改良を施した。
本研究は、DNAとRNAの双方に適用可能なmCRISPRを簡便に実施するための柔軟で強力なツールを提供し、今後、高度な細胞ネットワークの解明と複数遺伝子を同時に操作する遺伝子治療の実現に貢献することが期待される。
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