[注] レンチウイルス様粒子（Lentivirus-like particles: LVLPs）
CRISPR-Cas9 や塩基エディター (BE) などの遺伝子編集ツールの臨床応用には、標的細胞への送達法を最適化する必要がある。LVLPは、ウイルスベクターと非ウイルスベクターの利点を統合しているため、mRNA またはリボ核酸タンパク質 (RNP) を送達する担体として有望である。
現行のLVLP システムには、主に HIV-Gag タンパク質と Pol タンパク質が使用されているが、Pol の逆転写酵素とインテグラーゼは、ゲノム統合や潜在的な腫瘍形成のリスクを伴っている。北京を拠点とする研究者のチームは今回、これらのリスクを最小限に抑えるためにLVLPの改善に取り組んだ。
- Gag-Only戦略を実装し、HIV-Gag タンパク質を使用してLVLPを構築し、Pol に関連する統合リスクを排除した。
- MS2-MCP (MS2 コートタンパク質)、PP7 および PP7 BP (PP7 結合タンパク質)、および HIV-Gag による Ψ (HIV パッケージング シグナル) 間の相互作用を利用して、PD1 開始コドン (ATG) をターゲットとする PAM なしのアデニン塩基エディター (CE-8e-SpRY) mRNA と sgRNA を LVLP にカプセル化した。組み換えレンチウイルス ベクター技術を使用して、安定した PD1 発現 293T 細胞株 (PD1-293T) を開発し、LVLP の編集効率を評価した。
Ψ -LVLP は効果的なパッケージング機能を示し、293T 細胞で 15% のベース編集効率を達成した。プラスミド比率を最適化することで、CE-8e-SpRY mRNA コピー数が増加し、30% のベース編集効率が観察された。さらに、HDVrz（デルタ肝炎ウイルスリボザイム）とΨをsgRNAに統合すると（HDVrz-Ψ-LVLP）、sgRNAのコピー数が大幅に増加し、293T細胞では約50％の塩基編集効率、Jurkat細胞では20％の塩基編集効率が得られた。
メンデルランダム化解析により、PD1、B2M、CIITA、TIGIT 遺伝子とさまざまながんリスクの間には有意な遺伝的相関関係があることが明らかになった。さらに、B2M、CIITA、TIGIT の開始コドンを標的とするHDVrz-psi-LVLPは、Jurkat細胞と293T細胞の両方で高い塩基編集活性を示した。
LVLPの最適化されたプラットフォームは、CE-8e-SpRY mRNAとsgRNAを効果的にカプセル化し、複数の遺伝子と細胞タイプにわたって高い編集効率を実現した。
[出典] "Development and validation of optimized lentivirus-like particles for gene editing tool delivery with Gag-Only strategy" Jia J, Hao Y [..] Jin X, Ma X. Eur J Med Res. 2025-04-04. https://doi.org/10.1186/s40001-025-02499-2 [著者所属] National Research Institute for Family Planning (Beijing), Peking Union Medical College CAMS, National Human Genetic Resources Center (Beijing), National Institute for Viral Disease Control and Prevention (National Key Laboratory of Intelligent Tracking and Forecasting for Infectious Diseases)；グラフィカルアブストラクト
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