ここでは、ガスダーミンDをコードするGSDMD 遺伝子のノックアウトを例に挙げて、THP1のようなトランスフェクションが困難な浮遊性免疫細胞株において、単一遺伝子ノックアウトを段階的に実現するためのアプローチが紹介されている。
レンチウイルスを介して送達されるCRISPR-Cas9システムを用いることで、sgRNAを介した精密な遺伝子破壊が可能になる。主要なステップは、特定のsgRNAの設計、CRISPRベクターへのクローニング、ウイルスパッケージング、標的細胞への導入、そして、コロニーPCR、シーケンシング、ウェスタンブロッティングによる段階的な検証と選択である
[グラフィカルアブストラクト引用右下図参照]。
レンチウイルスを介して送達されるCRISPR-Cas9システムを用いることで、sgRNAを介した精密な遺伝子破壊が可能になる。主要なステップは、特定のsgRNAの設計、CRISPRベクターへのクローニング、ウイルスパッケージング、標的細胞への導入、そして、コロニーPCR、シーケンシング、ウェスタンブロッティングによる段階的な検証と選択である
[グラフィカルアブストラクト引用右下図参照]。 レンチウイルス送達を用いてエレクトロポレーションなどこれまで試みられてきた手法ではトランスフェクションが困難なTHP1細胞向けに最適化されたCRISPR-Cas9ベースのノックアウト戦略は、免疫細胞の機能研究に特に有用であり、複雑な細胞経路における遺伝子機能を信頼性の高い方法で探索することを可能にする。
[出典] "Protocol for Generation of Single-Gene Knockout in Hard-to-Transfect THP1 Cell Lines Using CRISPR/Cas9" Srivastava K, Pandit B. Bio Protoc. 2025-07-05. https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5365 [著者所属] BRIC-National Institute of Biomedical Genomics (BRIC-NIBMG) Kalyani (インド), Regional Centre for Biotechnology
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