胚中心（germinal center：GC）B細胞の生物学を再現するin vitroモデルが存在しないため、遺伝子研究には動物モデルの使用が不可欠です。今回、ロックフェラー大学のMichel C. Nussenzweig教授とJun P. Hong博士研究員が、STAR Protocols 誌刊行論文にて、エコトロピック・レトロウイルスを用いたマウスGC B細胞に対するin vivo CRISPRスクリーニングのプロトコルにおけるsgRNAライブラリーの構築手順、sgRNAライブラリーを帯びた抗原特異的B細胞からなる胚中心を生成するための免疫化手順、シーケンスおよびデータ解析手順について詳しく解説しています [グラフィカルアブストラクト引用下図参照]。
このプロトコルは、sgRNAスキャフォールド配列の改変 [＃1]、シーケンシング/インデックスプライマー [＃2]、および解析ツール [＃3] を含む既存のCRISPRスクリーンツールを統合し、マウスGC B細胞向けに最適化しているところが、特徴です。
[出典] Protocol "Protocol for an in vivo CRISPR screen for germinal center B cells in mice using ecotropic retrovirus" Jun P. Hong (1), Michel C. Nussenzweig (1,2). STAR Protoc. 2026-05-21. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2026.104586
- Laboratory of Molecular Immunology, The Rockefeller University, New York, NY 10065, USA
- Howard Hughes Medical Institute (HHMI), The Rockefeller University, New York, NY 10065, USA
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- "Dynamic imaging of genomic loci in living human cells by an optimized CRISPR/Cas system" Baohui Chen [..] Lei S. Qi, Bo Huang. Cell. 2013-12-19.
- "Functional Genomics In Vivo Reveal Metabolic Dependencies of Pancreatic Cancer Cells" Xiphias Ge Zhu [..] Kıvanç Birsoy. Cell Metab. 2020-11-04/2021 Jan.
- "MAGeCK enables robust identification of essential genes from genome-scale CRISPR/Cas9 knockout screens" Wei Li [..] X Shirley Liu. Genome Biology. 2014-12-05.
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