１．SunTag法をポリシストロニックへと拡張することで、テロメアの超解像顕微鏡による分析を実現
- [出典]"(Po)STAC (Polycistronic SunTAg modified CRISPR) enables live-cell and fixed-cell super-resolution imaging of multiple genes" Neguembor MV, Sebastian-Perez R, Aulicino F, Gomez-Garcia PA, Cosma MP, Lakadamyali M. Nucleic Acids Res. 2017 Dec 23.
- 蛍光タンパク質（FP）をdCas9に融合するCRISPR技術によって、生細胞内で反復配列および非反復配列の多重可視化（多色化）が進展した。しかし、FPによる標識効率が低く、超解像顕微鏡法への展開は進まなかった。Barcelona Institute of Science and Technologyの研究チームは今回、SunTagとポリシストロニクス・ベクターの既存の２つの技術を組み合わせることで、超解像顕微鏡によるテロメア動態の観察を実現した。
- SunTag法によって標的を24コピーまでの蛍光タンパク質sfGFPで標識し（下図左のA；ただし、Protein Cell論文からの引用）、ポロシストロニクス・ベクター（下図Supplementary Figure 1(B)）によって、内在リボヌクレアーゼの標的となるtRNAとsgRNAのペアを反復させた合成遺伝子からsgRNAsを精密かつ多重に発現することで、標識効率と標識からのシグナル強度を改善し、PoSTAC (Polycistronic SunTAg-modified CRISPR) と称し、ポリシストロニック・ベクターを使用しない手法をSTAC (SunTAg modified CRISPR)と称した。
- (Po)STACによる、標識効率と蛍光シグナルのS-N比（標的に結合したdCas9-FPからの蛍光と、核質内に滞留す非結合dCas9-FPからの蛍光の比）の改善：HeLa細胞において、配列の反復度が高いテロメアと、配列の反復度が中程度あるいは低いMucin1 と4（MUC1とMUC4）を標的とする(Po)STACの効果を共焦点顕微鏡で確認（上図右 Figure 1 -A-E）
- テロメアの長さが短い(6 kb)のHeLaと長い(23 kb)のHeLa1.3の固定細胞において、STACと超解像顕微鏡STORM（STochastic Optical Reconstruction Microscopy） でテロメア・コンパクションを可視化比較（上図右；Figure 2-Dは、ボロノイ・テッセレーションによるテロメア領域の同定と比較）
- STAC-STORMにより、HeLaとHeLa1.3の生細胞内でのテロメア動態観察（上図右）
２．[プロトコル（ビデオとPDF）]標的DNAの酵素消化により、任意のDNA源から大規模gRNAライブラリーを、効率的かつ低コスト構築可能とするシンプルなプロトコル
３．[研究資源]CRISPR/Cas9によりヒトES細胞からFHL2ホモ型ノックアウト細胞株を樹立
- [出典]"Generation of FHL2 homozygous knockout lines from human embryonic stem cells by CRISPR/Cas9-mediated ablation" Changa CW, Changb CC, Hsiab KC, Tsaia SY. Stem Cell Res. 2018 Mar;27:21-24. Available online 23 December 2017.
- 拡張型心筋症の発症メカニズムと創薬スクリーニングに有用な研究資源
４．イネにおいて、野生型SpCas9は、NGG PAMと共にNAG PAMも認識し、安定したゲノム編集を実現する
[出典]"Robust genome editing of CRISPR-Cas9 at NAG PAMs in rice" Meng X, Hu X, Liu Q, Song X, Gao C, Li J, Wang K. Sci China Life Sci. 2017 Dec 25.
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