１．変異KRASを標的とするCRISPR-Cas9により腫瘍成長を制御する
  • Kim HH, ~ Paik S2. "Targeting mutant KRAS with CRISPR-Cas9 controls tumor growth" 
    Genome Res. 2018 Jan 11.
  • 腫瘍変異KRAS遺伝子（c.35G>T(p.G12V); c.35G>A (p.G12D); c.38G>A (p.G13D)）に選択的に作用するgRNA（35T9P17）を同定し、Cas9をコードするレンチウイルスで形質転換したKRAS変異腫瘍細胞において、35T9P17 gRNAの発現をドキシサイクリンで誘導することで、in vitroでの腫瘍増殖を阻害した。
  • また、Cas9と35T9P17 gRNAを発現するレンチウイルスを腫瘍内局所送達することで、腫瘍増殖をin vivoでも抑制。
  • Cas9と35T9P17 gRNAは、野生型KRASを帯びた細胞の生存と増殖には影響を与えなかった。
２．ヒト獲得免疫応答を回避したタンパク質薬剤の反復投与実現を目指して‘immune orthogonal’ orthologsを探索
  • Moreno AM, Palmer N, Aleman F, Chen G, Pla A, Chew WL, Law M, Mali P. "Exploring protein orthogonality in immune space: a case study with AAV and Cas9 orthologs" bioRxiv. Posted January 10, 2018.
  • 遺伝子治療のツールとして期待されているCRISPR-Cas9のAAV送達の"immune orthogonality" の評価を目指して、Cas9（91種類のオーソログ）とAAV（VP1カプシドタンパク質のオーソログ167種類）について、アミノ酸配列の同一性を確認し、アミノ酸配列からMHCクラスIとクラスⅡ複合体の結合強度を推定；ヒト免疫システムに対する応答が互いに独立と同定したCas9オーソログのうち、SpCas9とSaCas9を数種類のAAVでマウスに送達して検証
  • [CRISP_BIO 注]「ヒトはSpCas9とSaCas9に対する抗体を帯びている」とするbioRxiv投稿あり
３．CRISPR/Cas9によるカニクイザルへのノックイン ２報（CRISPR_BIOの環境で入手できたのは書誌情報のみです）
  • Yao X, Liu Z, Wang X, Wang Y, Nie YH, Lai L, Sun R, Shi L, Sun Q, Yang H. "Generation of knock-in cynomolgus monkey via CRISPR/Cas9 editing" Cell Res. 2018 Jan 12.
  • Cui Y, ~  Guo X, Huang X, Ji W. "Generation of a precise Oct4-hrGFP knockin cynomolgus monkey model via CRISPR/Cas9-assisted homologous recombination" Cell Res. 2018 Jan 12. Posted January 10, 2018
４．[プロトコル]CRISPR/Cas9システムによりマウス腫瘍細胞においてカテプシンBをノックダウンする
  • Gnanamony M., Gondi C.S. "Targeting the Expression of Cathepsin B Using CRISPR/Cas9 System in Mammalian Cancer Cells" In: Cal S., Obaya A. (eds) Proteases and Cancer. Methods in Molecular Biology, vol 1731. First Online 2018 Jan 10.
  • リソソームに局在するシステインプロテアーゼの一種であるカテプシンBは、正常な生理機能に重要は役割を果たしているが、過剰発現は腫瘍の浸潤や転移に関与するとされている。
５．デュアルgRNA/Cas9複合体（RNP）を、損傷の無い透明帯を帯びたマウス受精卵母細胞にエレクトロポレーションすることで、クローニング不要の簡便で効率的なゲノム編集を実現
  • Teixeira M, Py BF, Bosc C, Laubreton D, Moutin MJ, Marvel J, Flamant F, Markossian S. "Electroporation of mice zygotes with dual guide RNA/Cas9 complexes for simple and efficient cloning-free genome editing" Sci Rep. 2018 Jan 11;8(1):474.
  • 挿入図は、デュアルgRNAおよび実験プロトコルと編集結果；
dual guide RNA 1 dual guide RNAs 2
  • 本プロコトルにより、胚移植に精通していればクローニングや卵母細胞マイクロインジェクションの経験が乏しくてもゲノム編集マウス作出が可能；NHEJを介した変異導入効率100%、2種類のRNPsによるゲノム領域削除または２箇所への変異導入、HDR用テンプレートとなるssODN併用による点変異導入を実現；モザイク現象は低頻度でオフターゲット編集の影響はF2世代で解析することで回避可能であるが、モザイクとオフターゲットをさらに抑制することも可能
６．[プロトコル]プール型shRNAおよびCRISPRスクリーンと評価法のプロトコル集
７．[プロトコル]プール型CRISPR-Cas9によるトキソプラズマ（T. Gondii）のゲノムワイドスクリーン
８．[レビュー]外来動物種に関する知識のギャップと研究のギャップを明らかにし、CRISPR-Casシステムによる遺伝子ドライブ研究開発の進め方を提案
  • Moro D, Byrne M, Kennedy M, Campbell S, Tizard M. "Identifying knowledge gaps for gene drive research to control invasive animal species: The next CRISPR step" Glob Ecol Conserv. 2018 Jan;13:e00363. Available online 13 January 2018.
  • オーストラリアの環境において、ハツカネズミ、ヨーロッパ・アカギツネ、野良猫、ヨーロッパ・カイウサギ、オオヒキガエル、クマネズミおよびヨーロッパ・ムクドリについて、生物学的、遺伝学的および生態学的情報を集約し、遺伝子ドライブの開発応用に向けて、埋めていく必要があるギャップ（情報のカテゴリー）を同定し、その上で、遺伝子ドライブの適用は野生ハツカネズミとヨーロッパ・カイウサギから始めるのが適切と判断。
９．[プロトコル]CRISPR/Cas9を自動マイクロインジェクターを利用して接合子の細胞質へ注入することで、変異マウスを作出
Automatic Microinjector 1 Automatic Microinjector 2
10．CRISPR/Cas9により、ウサギにて多重ホモログ遺伝子をノックアウト
  • Liu H, Sui T, Liu D, Liu T, Chen M, Deng J, Xu Y, Li Z. "Multiple homologous genes knockout (KO) by CRISPR/Cas9 system in rabbit" Gene. 2018 Jan 12.
  • 1,2-フコシル基転移酵素をコードする3種類の遺伝子、FUT1, FUT2ならびにSEC1の同時ノックアウトを実現し、このトリプルノックアウト・ウサギの血清中フコシル基転移酵素活性の低減を確認
11．エクトジスプラシン（EDA）のプロモーターを標的とするCRISPRa（CRISPR/dCas9+VP64）で、ヒト骨髄由来間葉系幹細胞（BM-MSCs）を汗腺様細胞（SGCs）へと効率的にリプログラム
  • Sun S, Xiao J, Huo J, Geng Z, Ma K, Sun X, Fu X. "Targeting ectodysplasin promotor by CRISPR/dCas9-effector effectively induces the reprogramming of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells into sweat gland-like cells" Stem Cell Res Ther. 2018 Jan 12;9(1):8.
  • CRISPRaによるEDAの活性化により、BM-MSCsからSGCsへの分化誘導を、in vitroおよびマウスin vivoで実現し、全層熱傷患者の治療法への展開の可能性を示した。
12．農業害虫タマナヤガ（Agrotis ipsilon）におけるyellow gene familyの同定と、CRISPR/Cas9によるAiyellow-yの機能解析
  • Chen X, Cao Y, Zhan S, Zhang Y, Tan A, Huang Y. "Identification of yellow gene family in Agrotis ipsilon and functional analysis of Aiyellow-y by CRISPR/Cas9" Insect Biochem Mol Biol. 2018 Jan 11.
  • Yellow gene familyはいくつかのモデル昆虫で同定されているが、非モデル昆虫ではほとんど同定されておらず、その機能もほとんど明らかになっていない。今回、農業害虫A. ipsilonにおいて7種類のyellow遺伝子（yellow-y, -b, -b2, -c, -d, -e, –h）を同定し、各遺伝子の発現が発生段階に依存することも見出した；CRISPR/Cas9によるyellow-y欠損に由来する表現型の変異を観察した。
13．CRISPR/Cas9によるヒト感染症腟トリコモナス（Trichomonas vaginalis）の遺伝子改変と遺伝子ノックアウト
  • Janssen BD, Chen YP, Molgora BM, Wang SE, Simoes-Barbosa A, Johnson PJ. "CRISPR/Cas9-mediated gene modification and gene knock out in the human-infective parasite Trichomonas vaginalis" Sci Rep. 2018 Jan 10;8(1):270.
  • T. vaginalisは複雑で反復が多いゲノムを有し、効率的な遺伝子導入法が存在しなかったところ、今回、 CRISPR/Cas9システムをnucleofectionで送達することで、遺伝子導入効率を向上し、T. vaginalis内の環状DNAプラスミドに内在する遺伝子変異の修復と、必須遺伝子2種類のノックアウトを実現。