７．crRNA/sgRNAの一部をDNAに置換したDNA-RNAキメラガイドによりオフターゲット作用抑制
- [出典] Yin H, ~Xue W, Langer R, Anderson DG. "Partial DNA-guided Cas9 enables genome editing with reduced off-target activity" Nat Chem Biol. 2018 Jan 29. (PubMed Central PMC5902734)
- CRISPR RNA (crRNA)のRNAヌクレオチドの一部をDNAヌクレオチドで置換したDNA-RNAキメラガイドにより、オフターゲット編集活性を抑制し、CRISPR-Cas9による効率的ゲノム編集を実現；この手法は、crRNAとtracrRNAを一体化したsgRNAや多重ガイドにも有効であり、Cpf1他のCRISPRシステムにも有効
８.flySAM/flySAM2.0：次世代ショウジョウバエ転写活性化法
- [出典] Ji Y, ~ Sun J, Perrimon N, Ni JQ. "Next generation CRISPR/Cas9 transcriptional activation in Drosophila using flySAM" bioRxiv. Posted January 31, 2018.
- 従来のCRISPRaを効率、スケーラビリティーおよび使い易さの観点で凌ぎ、GAL4/UASによる強制発現で得られる表現型に近い表現型をもたらす転写活性化因子flySAM/flySAM2.0を開発；TRiP-CRISPR Overexpression (TRiP-OE)（flySAM collection）を構築し、任意のGal4系統と交雑することで、組織特異的in vivo標的遺伝子発現活性化が可能に；多重活性化も実現
- flySAMのコンストラクト：UAS/dCas9-VP64/T2A/MCP/p65/HSF1 + U6-2/sgRNA/MS2(aptamer)
- flySAM2は、UAS:flySAMとsgRNAを単一プラスミドに集約
９．組換えAAV（rAAVs）を利用して、マウス胚のex vivo/in vivoゲノム編集を効率化
- [出典] Yoon Y, Wang D, Tai PWL, Riley J, Gao G, Rivera-Pérez JA. "Streamlined ex vivo and in vivo genome editing in mouse embryos using recombinant adeno-associated viruses" Nat Commun. 2018 Jan 29;9(1):412.
- 近年、CRISPR-Cas9技術によって齧歯類の遺伝子操作が簡易化されたが、着床前胚への核酸送達法が30年以上ほとんど変っていなかったところ、透明帯浸透性のrAAVを利用した効率的形質転換法を開発し、マウスにてNHEJによるindel変異生成（下図左）とHDRによる変異導入を実現；また、妊娠雌性マウスの卵管に直接rAAVを送達することでin vivo遺伝子編集も実現（下図右）
10． Synechococcus sp. PCC7002におけるRNase IIIホモログ3種類の機能の相違
- [出典] Gordon GC, Cameron JC, Pfleger BF. "Distinct and redundant functions of three homologs of RNase III in the cyanobacterium Synechococcus sp. strain PCC 7002" Nucleic Acids Res. 2018 Jan 24.
- RNase IIIはバクテリアにおいて、rRNA成熟、CRISPR RNA成熟、遺伝子発現、およびmRNAのターンオーバに関与する。 Synechococcusに存在する2種類の全長RNase III とdsRNA結合ドメインを欠損したRNase III (mini-III) の3種類のホモログの機能を解析し、pAQ6 (F0044–F0047)上のCRISPRタイプ III RAMPモジュールの一部である遺伝子群の制御に関わることも見出した。
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