６．遺伝子編集の三機能を備えたCRISPR/Casシステムによる酵母の代謝工学
- [出典] "Metabolic Engineering of Saccharomyces cerevisiae Using a Trifunctional CRISPR/Cas System for Simultaneous Gene Activation, Interference, and Deletion" Schultz C, Lian J, Zhao H. Methods Enzymol. 2018 May 8.
- 遺伝子の転写活性化 (Activation)、転写抑制 (Interference)および削除 (Deletion)を組み合わせ可能とする互いに直交するCRISPRシステムを利用する代謝工学戦略を解説
- 転写活性化因子を融合したdLbCpf1、転写抑制因子を融合したdSpCas9、および28-bpのフレームシフト変異導入によるノックアウトを誘導するSaCas9を利用。
- セルロース分解性糸状菌Trichoderma reeseiのエンドグルカナーゼIIの表面ディスプレーを実現。
７．CRISPR/Cas9と部分的に重複するオリゴヌクレオチドを組み合わせることで、酵母ゲノムへの遺伝子座特異的DNAタンデムリピート挿入を実現
- [出典] "Locus specific engineering of tandem DNA repeats in the genome of Saccharomyces cerevisiae using CRISPR/Cas9 and overlapping oligonucleotides" Lancrey A, Joubert A, Boulé JB. Sci Rep 2018 May 8.
- 多細胞真核生物ゲノムにおけるDNAリピートがジャンクDNAではなく、ゲノム構造や遺伝子発現調節に関与することが明らかになってきた。合成生物学においてDNAリピートを調節因子として活用することを目指して、多様なDNAリピートの１段階挿入を実現：リピート回数 1~100回；モノマーサイズ 46- ~ 165-bp；GC含量可変（下図左 DNAタンデムリピート生成のスキーム；下図右 リピートの組合せ例)
８．高温アルコール発酵酵母Kluyveromyces marxianusのCRISPR/Cas9標的をゲノムワイドで同定し、安定なハプロイド株を開発
- [出典] "Genome-wide prediction of CRISPR/Cas9 targets in Kluyveromyces marxianus and its application to obtain a stable haploid strain" Lee MH, Lin JJ, Lin YJ, Chang JJ, Ke HM, Fan WL, Wang TY, Li WH. Sci Rep 2018 May 9.
- K. marxianusの８種類のゲノムで保存されている標的サイトを同定し、高熱耐性など産業利用に適した特性を有するK. marxianus 4G5株のMATα3遺伝子をノックアウトし接合型スイッチングを阻害し、安定なハプロイド株を樹立
９．[レビュー]有用化合物のバイオプロダクションを向上するダイナミックな転写回路をCRISPR-Casで構築する
- [出典] "Prospects for engineering dynamic CRISPR–Cas transcriptional circuits to improve bioproduction" Fontana J, Voje WE, Zalatan JG, Carothers JM. J Ind Microbiol Biotechnol 2018 May 8.
- 細胞の状態に応じて複数の内在および外来遺伝子の発現を微調整可能とするCRISPR-Cas9転写調節の研究動向と合成生物学と代謝工学への展開をレビュー
10．CRISPR-Cas9システムによりイネこうじ病菌Ustilaginoidea virensのUSTAおよびUvSLT2遺伝子を削除
- [出典] "Targeted deletion of the USTA and UvSLT2 genes efficiently in Ustilaginoidea virens with the CRISPR-Cas9 system" Liang Y, Han Y, Wang C, Jiang C, Xu JR. Front Plant Sci. 2018 May 7.
- アグロバクテリウム形質転換法に優る編集効率を実現；USTA変異は表現型に影響せず、UvSLT2変異は細胞壁ストレスへの感受性上昇をもたらした
11．枯草菌ファージの迅速で精密なin vivoゲノム編集
- [出典] "A CRISPR-Cas9-Based Toolkit for Fast and Precise In Vivo Genetic Engineering of Bacillus subtilis Phages" Schilling T, Dietrich S, Hoppert M, Hertel R. Viruses. 2018 May 4;10(5)241.
- ファージ療法による多剤耐性菌対策が議論されている。
- ファージの遺伝解析を促進するために単純で迅速な遺伝子工学ツールボックスを開発：プライマー設計ツールCutSPR 、CRISPR-Cas9による変異誘発プラスミドクローニング、およびプロファージ・フリーでスーパー・コンピタント (形質転換受容性) B. subtilis TS01を利用；モデルファージvB_BsuP-Goe1へクリーンな遺伝子の削除・挿入 (下図参照)で実証
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